CHO HCP ELISA Kit
አንድ-ደረጃ የበሽታ መከላከያ ELISA ዘዴ በዚህ ምርመራ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል.CHOK1 HCP የያዙ ናሙናዎች በአንድ ጊዜ ኤችአርፒ ከተሰየመው የፍየል ፀረ-CHOK1 ፀረ እንግዳ አካላት እና ፀረ-CHOK1 ፀረ እንግዳ አካላት ጋር በ ELISA ሳህን ላይ ተሸፍነዋል፣ በመጨረሻም የሳንድዊች ኮምፕሌክስ ጠጣር-ደረጃ ፀረ-ሰው-HCP-የተሰየመ ፀረ-ሰው ይመሰርታሉ።ያልታሰረ አንቲጂን-አንቲ እንግዳ የ ELISA ሳህን በማጠብ ሊወገድ ይችላል።በቂ ምላሽ ለማግኘት የቲኤምቢ ንጣፍ ወደ ጉድጓዱ ውስጥ ተጨምሯል።የማቆሚያውን መፍትሄ ከጨመረ በኋላ የቀለም እድገቱ ይቆማል, እና የኦዲ ወይም የመምጠጥ ዋጋ የምላሽ መፍትሄ በ 450/650nm በማይክሮፕሌት አንባቢ ይነበባል.የኦዲ እሴት ወይም የመምጠጥ ዋጋ በመፍትሔው ውስጥ ካለው የ HCP ይዘት ጋር ተመጣጣኝ ነው።ከዚህ በመነሳት, በመፍትሔው ውስጥ ያለው የ HCP ክምችት በመደበኛ ኩርባ መሰረት ሊሰላ ይችላል.
መተግበሪያ
ይህ ኪት በናሙናዎች ውስጥ የCHOK1 አስተናጋጅ ሕዋስ ፕሮቲን ቀሪዎችን ይዘት በቁጥር ለማወቅ ይጠቅማል።
Cተቃዋሚዎች
ኤስ/ኤን | አካል | ትኩረት መስጠት | የማከማቻ ሁኔታዎች |
1 | CHOK1 HCP መደበኛ | 0.5mg/ml | ≤–20℃ |
2 | ፀረ-CHO HCP-HRP | 0.5mg/ml | ≤–20℃፣ ከብርሃን ይከላከሉ። |
3 | ቲ.ኤም.ቢ | NA | 2-8℃, ከብርሃን ይከላከሉ |
4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
5 | መፍትሄ አቁም | NA | RT |
6 | ማይክሮፕሌት ማሸጊያዎች | NA | RT |
7 | BSA | NA | 2-8℃ |
8 | ከፍተኛ የማስታወቂያ ቅድመ-ቅብ ሰሌዳዎች | NA | 2-8℃ |
አስፈላጊ መሣሪያዎች
የፍጆታ ዕቃዎች / መሳሪያዎች | ማምረት | ካታሎግ |
የማይክሮፕሌት አንባቢ | ሞለኪውላዊ መሳሪያዎች | Spectra Max M5፣ M5e ወይም ተመጣጣኝ |
Thermomixer | ኢፔንዶርፍ | Eppendorf/5355፣ ወይም ተመጣጣኝ |
የቮርቴክስ ማደባለቅ | ኢካ | MS3 ዲጂታል፣ ወይም ተመጣጣኝ |
ማከማቻ እና መረጋጋት
1.መጓጓዣ በ -25 ~ -15 ° ሴ.
2.የማከማቻ ሁኔታዎች በሰንጠረዥ 1 ላይ እንደሚታየው;ክፍሎች 1-2 ይቀመጣሉ ≤-20 ° ሴ, 5-6 ተቀምጠዋል RT,3,4,7,8 በ2-8℃ ላይ ተከማችተዋል;ተቀባይነት ያለው ጊዜ 12 ወራት ነው.
የምርት መለኪያዎች
1.ትብነት: 1ng/ml
2.የማወቂያ ክልል: 3-100ng/ml
3.ትክክለኛነት፡ ውስጠ-ግምገማ CV≤ 10%፣ inter-asay CV≤ 15%
4.HCP ሽፋን፡> 80%
5.ልዩነት፡ ይህ ኪት ከ CHOK1 ኤች.ሲ.ፒ. ሲ.ፒ.ኦ ከማጥራት ሂደት ነፃ የሆነ ምላሽ ስለሚሰጥ ሁለንተናዊ ነው።
Reagent ዝግጅት
1.ፒቢኤስቲ 0.05%
15 ml ከ 20×PBST 0.05% ይውሰዱ, በddH ውስጥ ይቀልጣሉ2ኦ, እና እስከ 300 ሚሊ ሊትር የተሰራ.
2.1.0% BSA
ከጠርሙሱ 1 g BSA ይውሰዱ እና በ 100 ሚሊር PBST 0.05% ውስጥ ይቅፈሉት, ሙሉ በሙሉ እስኪፈርስ ድረስ በደንብ ይደባለቁ እና በ2-8 ° ሴ ያስቀምጡ.የተዘጋጀው የማሟሟት ቋት ለ 7 ቀናት ያገለግላል።እንደ አስፈላጊነቱ ለማዘጋጀት ይመከራል.
3.የማወቂያ መፍትሄ 2μg/ml
48μL የ 0.5 mg/mL ፀረ-CHHO HCP-HRP ይውሰዱ እና በ11,952μL ከ1% BSA ውስጥ በማፍሰስ የመጨረሻ የ2μg/ml ማወቂያ መፍትሄ ለማግኘት።
4.QC እና የCHOK1 HCP ደረጃዎች ዝግጅት
ቱቦ አይ. | ኦሪጅናል | ትኩረት መስጠት | ድምጽ | 1% ቢኤስኤ | ጠቅላላ መጠን | የመጨረሻ |
A | መደበኛ | 0.5mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
S1 | B | 1,000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
ሠንጠረዥ: የ QC እና ደረጃዎች ዝግጅት
የመተንተን ሂደት
1.ከላይ በ "Reagent Preparation" ላይ እንደተመለከተው ሬጀንቶችን ያዘጋጁ።
2.በእያንዳንዱ ጉድጓድ ውስጥ 50μL ደረጃዎችን, ናሙናዎችን እና QCs (ሰንጠረዥ 3 ይመልከቱ) ይውሰዱ, ከዚያም 100μL የ Detection መፍትሄ (2μg / ml) ይጨምሩ;ሳህኑን በማሸጊያው ይሸፍኑ እና የኤሊዛን ንጣፍ በቴርሞሚክስ ላይ ያድርጉት።በ 500rpm, 25± 3℃ ለ 2 ሰዓታት ይትከሉ.
3.በማጠቢያው ውስጥ ያለውን ማይክሮፕሌት ይለውጡ እና የሽፋኑን መፍትሄ ያስወግዱ.Pipette 300μL PBST 0.05% ወደ እያንዳንዱ ጉድጓድ የ ELISA ንጣፉን ለማጠብ እና መፍትሄውን ለመጣል, እና መታጠቢያውን 3 ጊዜ ይድገሙት.ሳህኑን በንፁህ የወረቀት ፎጣ ላይ ገልብጥ እና ደረቅ.
4.በእያንዳንዱ ጉድጓድ ውስጥ 100μL የTMB ንጣፍ (ሰንጠረዥ 1 ይመልከቱ) ይጨምሩ ፣ ELISA ን ያሽጉ እና በጨለማ ውስጥ በ 25 ± 3 ℃ ለ 15 ደቂቃዎች ይጨምሩ ።
5.Pipette 100μL የማቆሚያ መፍትሄ ወደ እያንዳንዱ ጉድጓድ.
6.በ450/650nm የሞገድ ርዝመት በማይክሮፕሌት አንባቢ የመጠጣትን መጠን ይለኩ።
7.በሶፍትማክስ ወይም በተመጣጣኝ ሶፍትዌር መረጃን ይተንትኑ።ባለአራት መለኪያ ሎጂስቲክስ ሪግሬሽን ሞዴል በመጠቀም መደበኛውን ከርቭ ያሴሩ።
መደበኛ ኩርባ ምሳሌ
ማሳሰቢያ፡- በናሙናው ውስጥ ያለው የኤች.ሲ.ፒ.ሲ ትኩረት ከመደበኛው ከርቭ የላይኛው ወሰን በላይ ከሆነ፣ ከመሞከርዎ በፊት በዲሉሽን ቋት በትክክል መሟሟት አለበት።
ማስታወሻዎች
የማቆሚያው መፍትሄ 2M ሰልፈሪክ አሲድ ነው፣እባክዎ እንዳይረጭ በጥንቃቄ ይያዙ!