ፒኤንጂሴ ኤፍ
Peptide-N-Glycosidase F (PNGase F) ሁሉንም ከ N-linked oligosaccharides ከ glycoproteins ውስጥ ለማስወገድ በጣም ውጤታማው የኢንዛይም ዘዴ ነው።PNGase F ከኤን-የተገናኙ glycoproteins ከፍተኛ የ GlcNAc እና አስፓራጂን ቅሪቶች መካከል የሚሰነጠቅ አሚዳሴ ነው።
መተግበሪያ
ይህ ኢንዛይም የካርቦሃይድሬት ቅሪቶችን ከፕሮቲኖች ውስጥ ለማስወገድ ይጠቅማል።
ዝግጅት እና ዝርዝር መግለጫ
| መልክ | ቀለም የሌለው ፈሳሽ |
| የፕሮቲን ንፅህና | ≥95% (ከኤስዲኤስ-ገጽ) |
| እንቅስቃሴ | ≥500,000 ዩ/ሚሊ |
| Exoglycosidase | ምንም እንቅስቃሴ ሊገኝ አልቻለም (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| ኢንዶግሊኮሲዳሴ ኤች | ND |
| ፕሮቲሲስ | ND |
ንብረቶች
| EC ቁጥር | 3.5.1.52(ከማይክሮ ኦርጋኒዝም የተቀላቀለ) |
| ሞለኪውላዊ ክብደት | 35 ኪዳ (ኤስዲኤስ-ገጽ) |
| አይዞኤሌክትሪክ ነጥብ | 8. 14 |
| ምርጥ ፒኤች | 7.0-8.0 |
| ምርጥ ሙቀት | 65 ° ሴ |
| የከርሰ ምድር ልዩነት | በ GlcNAc እና በአስፓራጂን ቅሪቶች መካከል ግላይኮሲዲክ ቦንዶችን መቆራረጥ ምስል 1 |
| እውቅና ጣቢያዎች | N-linked glycans α1-3 fucose ምስል 2 ካልያዘ በስተቀር |
| አንቀሳቃሾች | ዲቲቲ |
| ማገጃ | ኤስ.ዲ.ኤስ |
| የማከማቻ ሙቀት | -25 ~-15 ℃ |
| የሙቀት ማነቃቂያ | 1µL PNGase F የያዘ የ 20µL ምላሽ ድብልቅ በ 75 ° ሴ ለ 10 ደቂቃዎች እንዲነቃ ይደረጋል። |
ምስል 1 የPNGase ኤፍ ንኡስ አካል ልዩነት
ምስል 2 የPNGase ኤፍ እውቅና ተቀምጧል።
የውስጣዊው የ GlcNAc ቅሪቶች ከα1-3 fucose ጋር ሲገናኙ፣ PNGase F N-linked oligosaccharidesን ከ glycoproteins ሊነጥቃቸው አይችልም።ይህ ለውጥ በእጽዋት እና በአንዳንድ ነፍሳት glycoproteins ውስጥ የተለመደ ነው.
Cተቃዋሚዎች
|
| አካላት | ትኩረት መስጠት |
| 1 | ፒኤንጂሴ ኤፍ | 50 µl |
| 2 | 10× Glycoprotein Denaturing Buffer | 1000 µl |
| 3 | 10× GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 µl |
የክፍል ትርጉም
አንድ አሃድ(U) ማለት ካርቦሃይድሬትን>95% ካርቦሃይድሬትን ከ10 μg denatured RNase B በ 1 ሰአት በ 37°C በጠቅላላው 10µL ለማስወገድ የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን ተብሎ ይገለጻል።
ምላሽ ሁኔታዎች
1.1-20 μግ ግላይኮፕሮቲንን በዲዮኒዝድ ውሃ ይቀልጡት፣ 1 µl 10× Glycoprotein Denaturing Buffer እና H2O (አስፈላጊ ከሆነ) የ10 µl አጠቃላይ ምላሽ መጠን ይጨምሩ።
2.በ 100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 10 ደቂቃዎች ይንቁ, በበረዶ ላይ ያቀዘቅዙ.
3.2µl 10× GlycoBuffer 2, 2 μl 10% NP-40 ይጨምሩ እና ቅልቅል።
4.1-2 μl PNGase F እና H ይጨምሩ2ኦ (አስፈላጊ ከሆነ) የ 20 µl አጠቃላይ ምላሽ መጠን እና ድብልቅ ለማድረግ።
5.በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 60 ደቂቃዎች ምላሽ ይስጡ.
6.ለ SDS-PAGE ትንተና ወይም የ HPLC ትንተና.
