5× Neoscript ፈጣን RT-qPCR Premix plus-UNG
የድመት ቁጥር፡ HCB5142A
ኒዮስክሪፕት ፈጣን RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) በጣም የተረጋጋ ባለ አንድ-ቱቦ መመርመሪያ-ተኮር ድብልቅ ለአንድ-ደረጃ በግልባጭ ቅጂ እና ለቁጥር PCR (qRT-PCR) ተስማሚ ነው።ፕሪመር እና መመርመሪያዎችን ቅድመ-መቀላቀልን ይደግፋል እና በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ከረጅም ጊዜ ማከማቻ በኋላ ተረጋግተው ይቆዩ።የሚሞከረው ናሙና በሚጠቀሙበት ጊዜ በቀጥታ መጨመር ይቻላል, ያለ ተጨማሪ የቧንቧ መክፈቻ / ቧንቧ ስራ.ይህ ምርት ክፍሎችን ያቀርባል፣ ለምሳሌ የሙቅ ጅምር ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን፣ ኤም-ኤምኤልቪ፣ ሙቀት-ላባይል uracil DNA glycosylase (TS-UNG)፣ RNase Inhibitor፣ MgCl2, dNTPs (ከ dTTP ይልቅ ከ dUTP ጋር) እና ማረጋጊያዎች.በጄኔቲክ የተሻሻለው ፈጣን ማጉላት ሪቨርስ ትራንስክሪፕትሴ እና ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዜሽን በ20-40 ደቂቃዎች ውስጥ PCR ማጉላትን ማጠናቀቅ ይቻላል።ይህ ሬጀንት ልዩ ቋት ለqPCR ከፀረ-የመከልከል ማጉላት ኢንዛይም እና UNG ኢንዛይም ከተደባለቀ ኢንዛይሞች ጋር ይጠቀማል።ስለዚህ የዒላማ ጂኖችን ጥሩ ማጉላት እና በ PCR ቀሪ እና በኤሮሶል ብክለት ምክንያት የሚከሰተውን የውሸት ማጉላት መከላከል ይችላል።ይህ ሬጀንት ከአብዛኛዎቹ የፍሎረሰንስ መጠናዊ PCR መሳሪያዎች እንደ አፕሊድ ባዮ ሲስተምስ፣ ኢፔንዶርፍ፣ ባዮ-ራድ እና ሮቼ ካሉ አምራቾች ጋር ተኳሃኝ ነው።
አካል
1.25× Neoscript ፈጣን RTase/UNG ድብልቅ
2.5× Neoscript ፈጣን RT Premix Buffer (dUTP)
የማከማቻ ሁኔታዎች
ሁሉም ክፍሎች በ -20 ℃ ለረጅም ጊዜ ማከማቻ እና 4℃ እስከ 3 ወር ድረስ መቀመጥ አለባቸው።እባክዎን ከቀለጠ በኋላ በደንብ ይቀላቀሉ እና ከመጠቀምዎ በፊት ሴንትሪፉል ያድርጉ።ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ.
qRT-PCR ምላሽ ስርዓት ዝግጅት
| አካላት | 25μLስርዓት | 50μLስርዓት | የመጨረሻ ትኩረት |
| 5× Neoscript ፈጣን RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25× Neoscript ፈጣን RTase/UNG ድብልቅ | 1μL | 2μL | 1× |
| 25× ፕሪመር-ፕሮብ ድብልቅa | 1μL | 2μL | 1× |
| አብነት አር ኤን ኤb | - | - | - |
| ddH2O | እስከ 25μL | እስከ 50μL | - |
1) ሀ.የፕሪመር የመጨረሻው ትኩረት ብዙውን ጊዜ 0.2μM ነው።ለተሻለ ውጤት, የፕሪሚየር ትኩረትን በ 0.2-1μM ክልል ውስጥ ማመቻቸት ይቻላል.በአጠቃላይ, የመርማሪው ትኩረት በ 0.1-0.3μM ክልል ውስጥ ማመቻቸት ይቻላል.
2) ፈጣን PCR አሰራርን በሚጠቀሙበት ጊዜ የፕሪመርሮች እና የፍተሻዎች ትኩረትን መጨመር የተሻለ የማጉላት ውጤቶችን ሊያስከትል ይችላል, እና የእነሱ ጥምርታ በዚሁ መሰረት ማመቻቸት አለበት.
3) የተለያዩ የናሙና ዓይነቶች የተለያዩ ዓይነቶችን እና የአነቃቂዎችን ይዘት እና የዒላማ ጂን ቅጂ ቁጥር ይይዛሉ።የናሙና መጠኑ በትክክለኛ ሁኔታ ግምት ውስጥ መግባት አለበት.አስፈላጊ ከሆነ ናሙናውን ከኒውክሊዝ-ነጻ ውሃ ወይም TE Buffer ጋር ይቅቡት።
ምላሽ ሲሁኔታዎች
| መደበኛ PCR ሂደት | ፈጣን PCR ሂደት | ||||||
| አሰራር | የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደት | አሰራር | የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደት |
| የተገላቢጦሽ ግልባጭ | 50℃ | 10-20 ደቂቃዎች | 1 | የተገላቢጦሽ ግልባጭ | 50℃ | 5 ደቂቃ | 1 |
| ፖሊሜሬዝ ማግበር | 95 ℃ | 1-5 ደቂቃ | 1 | ፖሊሜሬዝ ማግበር | 95 ℃ | 30 ዎቹ | 1 |
| ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 10-20 ሴ | 40-50 | ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 1-3 ሴ | 40-50 |
| ማቃለል እና ቅጥያ | 56-64℃ | ከ20-60ዎቹ | ማቃለል እና ቅጥያ | 56-64℃ | 3-20 ሴ | ||
የጥራት ቁጥጥር
1.የተግባር ማወቂያ፡ ስሜታዊነት፣ ልዩነት እና የqPCR ተደጋጋሚነት።
2.ምንም ውጫዊ የኒውክሊየስ እንቅስቃሴ የለም: ምንም ውጫዊ ኢንዶኑክለስ እና ኤክሶኑክለስ ብክለት የለም.
ማስታወሻዎች
1.የፈጣን የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ የማጉላት መጠን ከ 1 ኪባ/10 ሰከንድ ያነሰ ነው።የተለያዩ የ PCR መሳሪያዎች የተለያዩ የማሞቅ እና የማቀዝቀዝ ፍጥነቶች፣ የሙቀት መቆጣጠሪያ ሁነታዎች እና የሙቀት አማቂዎች አሏቸው፣ እናም የእርስዎን የፕሪመር/የመመርመሪያ ትኩረት እና የአሂድ ዘዴን ከተለየ ፈጣን PCR መሳሪያዎ ጋር በማጣመር ማመቻቸት አስፈላጊ ነው።
2.ይህ ምርት ሰፊ ተፈጻሚነትን ያከናውናል, እና ለከፍተኛ-ስሜታዊ ሞለኪውላር ምርመራ ተስማሚ ነው.ባለ ሶስት እርከን PCR ዘዴ ዝቅተኛ የማደንዘዣ የሙቀት መጠን ላላቸው ፕሪመር ወይም ረዣዥም ቁርጥራጮችን ከ 200 bp በላይ ለማጉላት ይመከራል።
3.የተለያዩ amplicons የ dUTP አጠቃቀም ቅልጥፍና እና ለ UNG የተለየ ስሜት ስላላቸው፣ UNG ሲስተሙን ሲጠቀሙ የመለየት ስሜቱ ከቀነሰ ሬጀንቶቹ ማመቻቸት አለባቸው።ካስፈለገ ለቴክኒክ ድጋፍ እባክዎ ያነጋግሩን።
4.የተሸከርካሪ PCR ምርቶችን ማጉላት ለማስቀረት የተወሰነ የሙከራ ቦታ እና ፒፔት ለማጉላት ያስፈልጋል።በጓንቶች ይሰሩ እና በተደጋጋሚ ይቀይሩ እና ከማጉላት በኋላ የ PCR ቱቦን አይክፈቱ.
