Rnase Inhibitor (ከግላይሰሮል ነፃ የሆነ)
Murine RNase inhibitor recombinant murine RNase inhibitor ከ E.coli የተገለጸ እና የተጣራ ነው።ከ RNase A፣ B ወይም C ጋር በ1፡1 ጥምርታ በኮቫለንት ባልሆነ ትስስር ይተሳሰራል፣ በዚህም የሶስቱን ኢንዛይሞች እንቅስቃሴ የሚገታ እና አር ኤን ኤን ከመበላሸት ይከላከላል።ነገር ግን፣ በ RNase 1፣ RNase T1፣ S1 Nuclease፣ RNase H ወይም RNase ከአስፐርጊለስ ላይ ውጤታማ አይደለም።Murine RNase inhibitor በ RT-PCR፣ RT-qPCR እና IVT mRNA የተፈተሸ ሲሆን ከተለያዩ የንግድ ሪቨር ትራንስክሪፕትሴዎች፣ ዲኤንኤ ፖሊመሬሴዎች እና አር ኤን ኤ ፖሊመሬሴዎች ጋር ተኳሃኝ ነበር።
ከሰዎች RNase አጋቾቹ ጋር ሲነጻጸር፣ murine RNase inhibitor ሁለት ሳይስቴይን (cysteines) አልያዘም ለኦክሳይድ በጣም ስሜታዊ የሆኑ ይህም አጋቾቹን እንዳይነቃ ያደርጋል።ይህም በዲቲቲ ዝቅተኛ ክምችት (ከ1 ሚሜ ያነሰ) እንዲረጋጋ ያደርገዋል።ይህ ባህሪ ከፍተኛ መጠን ያለው የDTT ምላሾች አሉታዊ በሆነበት ምላሽ ውስጥ ለመጠቀም ተስማሚ ያደርገዋል (ለምሳሌ የእውነተኛ ጊዜ RT-PCR)።
Aማመልከቻ
ይህ ምርት የአር ኤን ኤ መበላሸትን ለማስቀረት የ RNase ጣልቃገብነት በሚቻልበት በማንኛውም ሙከራ ላይ በስፋት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፡-
1.First-strand cDNA ውህደት, RT-PCR, RT-qPCR, ወዘተ.
በብልቃጥ ግልባጭ/ ትርጉም (ለምሳሌ በብልቃጥ ውስጥ የቫይረስ ማባዛት) 2.አር ኤን ኤ ከመበላሸት ይጠብቃል።
3.አር ኤን ኤ ማግለል እና መንጻት ወቅት RNase እንቅስቃሴ inhibition.
የማከማቻ ሁኔታዎች
በ -25～-15 ℃ ማከማቻ;
የቀዘቀዙ ዑደቶች ≤ 5 ጊዜ;
ለ1 አመት የሚሰራ።
የክፍል ትርጉም
አንድ ክፍል የ 5 ng RNase A እንቅስቃሴን በ 50% ለመግታት የሚያስፈልገው የ RNase Inhibitor መጠን ይገለጻል.
ሞለኪውላዊ ክብደት
RNase Inhibitor (Glycerol-free) 50 kDa ፕሮቲን ነው።
የጥራት ቁጥጥር
Exonuclease ተግባር፡-
የ 40 ዩ ኢንዛይም በ 1 μg λ-Hind III ዲኤንኤን ለ16 ሰአታት በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ መፈልፈል በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንደተወሰነው የዲ ኤን ኤ መበላሸት አያስከትልም።
የኢንዶኑክለስ እንቅስቃሴ;
40 ዩ ኢንዛይም በ 1 μg λ ዲ ኤን ኤ ለ 16 ሰአታት በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ መፈልፈፍ በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንደተወሰነው የዲ ኤን ኤ ውድቀት ሊታወቅ አልቻለም።
ኒኪንግ ተግባር፡-
40 ዩ ኢንዛይም በ 1 μg pBR322 ለ 16 ሰአታት በ 37 ℃ ውስጥ መፈልፈሉ በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንደተወሰነው የዲኤንኤ ውድቀት ሊታወቅ አልቻለም።
RNase እንቅስቃሴ:
40 ዩ ኢንዛይም ከ 1.6 μg MS2 አር ኤን ኤ ጋር ለ 4 ሰአታት በ 37 ℃ መፈልፈሉ በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንደተወሰነው የአር ኤን ኤ ውድቀት ሊታወቅ አልቻለም።
E.ኮላይ ዲ ኤን ኤ;
40 ዩ ኢንዛይም በTaqMan qPCR ተገኝቷል።የኢ.ኮሊ ዲ ኤን ኤ ≤ 0. 1pg/40U ነው።
Notes
1. ኢንዛይም እንዳይሰራ ለመከላከል በኃይል አይንቀጠቀጡ ወይም አያንቀሳቅሱ።
2.RNase inhibitor ከ 25 ℃ እስከ 55 ℃ ባለው የሙቀት መጠን ንቁ ሲሆን በ≥65 ≥65 ℃ ላይ ገቢር ሆኗል።
3. የ RNase H, RNase 1 እና RNase T1 እንቅስቃሴ አልተከለከለም.
4.የ RNase እንቅስቃሴን ለመግታት የፒኤች ክልል ሰፊ ነው (በ pH 5-9 ላይ ንቁ), ከፍተኛ እንቅስቃሴን በ pH 7-8 ያሳያል.
