ፕሮቲን K mNGS (ፈሳሽ)
ፕሮቲኔዝ ኬ ሰፊ የንዑስ ክፍል ልዩነት ያለው የተረጋጋ ሴሪን ፕሮቲን ነው።በንጽህና ማጽጃዎች ውስጥ እንኳን ብዙ ፕሮቲኖችን በአገሬው ግዛት ውስጥ ይቀንሳል.ከክሪስታል እና ሞለኪውላዊ መዋቅር ጥናቶች የተገኘው መረጃ እንደሚያመለክተው ኢንዛይሙ የሱብሊሲን ቤተሰብ የሆነ ንቁ የሳይት ካታሊቲክ ትሪያድ (Asp) ነው።39- የእሱ69- ሰር224).ዋነኛው የዝርፊያ ቦታ ከካርቦክሳይል ቡድን የአልፋቲክ እና ጥሩ መዓዛ ያላቸው አሚኖ አሲዶች የታገዱ የአልፋ አሚኖ ቡድኖች ጋር ያለው የፔፕታይድ ቦንድ ነው።እሱ በተለምዶ በሰፊው ልዩነቱ ጥቅም ላይ ይውላል።ይህ ፕሮቲን ኬ በተለይ ለኤምኤንጂኤስ የተነደፈ ነው።ከሌላው ፕሮቲን ኬ ጋር ሲነጻጸር፣ ከተመሳሳይ የኢንዛይም አፈጻጸም ጋር ያነሰ የኑክሊክ አሲድ ብክለትን ይይዛል፣ ይህም የታችኛውን mNGS አተገባበር በተሻለ ሁኔታ ሊያረጋግጥ ይችላል።
የማከማቻ ሁኔታዎች
2-8 ℃ ለ 2 ዓመታት
ዝርዝር መግለጫ
| መልክ | ከቀለም እስከ ቀላል ቡናማ ፈሳሽ |
| እንቅስቃሴ | ≥800 U/ml |
| የፕሮቲን ክምችት | ≥20 mg/ml |
| ኒካሴ | ምንም አልተገኘም። |
| ዲናሴ | ምንም አልተገኘም። |
| RNase | ምንም አልተገኘም። |
ንብረቶች
| EC ቁጥር | 3.4.21.64(ዳግመኛ ከትሪቲራቺየም አልበም) |
| አይዞኤሌክትሪክ ነጥብ | 7.81 |
| ምርጥ ፒኤች | 7.0-12.0 ምስል 1 |
| ምርጥ ሙቀት | 65 ℃ ምስል 2 |
| የፒኤች መረጋጋት | ፒኤች 4.5-12.5 (25 ℃፣ 16 ሰ) ምስል 3 |
| የሙቀት መረጋጋት | ከ50 ℃ በታች (pH 8.0፣ 30 ደቂቃ) ምስል 4 |
| የማከማቻ መረጋጋት | ከ90% በላይ እንቅስቃሴ ለ12 ወራት በ25 ℃ |
| አንቀሳቃሾች | SDS, ዩሪያ |
| ማገጃዎች | Diisopropyl fluorophosphate;phenylmethylsulfonyl ፍሎራይድ |
መተግበሪያዎች
1. የጄኔቲክ መመርመሪያ ኪት
2. አር ኤን ኤ እና ዲ ኤን ኤ የማስወጫ ዕቃዎች
3. ፕሮቲን ያልሆኑ ንጥረ ነገሮችን ከቲሹዎች ማውጣት፣ እንደ ዲ ኤን ኤ ያሉ የፕሮቲን ቆሻሻዎች መበላሸትክትባቶች እና የሄፓሪን ዝግጅት
4. በ pulsed electrophoresis የክሮሞሶም ዲ ኤን ኤ ማዘጋጀት
5. ምዕራባዊ ነጠብጣብ
6. ኢንዛይም glycosylated albumin reagents በብልቃጥ ውስጥ ምርመራ
ቅድመ ጥንቃቄዎች
ሲጠቀሙ ወይም ሲመዘኑ የመከላከያ ጓንቶችን እና መነጽሮችን ይልበሱ እና ከተጠቀሙ በኋላ በደንብ አየር እንዲዘጉ ያድርጉ።ይህ ምርት የቆዳ አለርጂዎችን እና ከባድ የአይን ብስጭት ሊያስከትል ይችላል.ከተነፈሰ አለርጂ ወይም አስም ምልክቶች ወይም የመተንፈስ ችግር ሊያስከትል ይችላል።የመተንፈስ ችግር ሊያስከትል ይችላል.
የክፍል ትርጉም
አንድ አሃድ (U) 1 ማይክሮሞል ለማምረት ኬዝይንን ሃይድሮላይዝ ማድረግ የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን ተብሎ ይገለጻል።በሚከተሉት ሁኔታዎች ውስጥ ታይሮሲን በደቂቃ.
Reagents ዝግጅት
ሬጀንት I፡ 1ጂ ወተት ኬሲን በ50ሚሊ የ 0.1M የሶዲየም ፎስፌት መፍትሄ (pH 8.0)፣ በ65-70 ℃ ውሃ ውስጥ ለ 15mins ተከፍሎ፣ ተቀላቅሎ እና ሟሟ፣ በውሃ የቀዘቀዘ፣ በሶዲየም ሃይድሮክሳይድ ወደ ፒኤች 8.0 የተስተካከለ እና ቋሚ መጠን 100 ሚሊ ሊትር.
Reagent II፡ 0.1M trichloroacetic acid፣ 0.2M sodium acetate፣ 0.3M አሴቲክ አሲድ።
Reagent III: 0.4M ና2CO3መፍትሄ.
ሬጀንት IV፡ ፎሪንት ሬጀንት በንጹህ ውሃ ለ 5 ጊዜ ተበረዘ።
Reagent V፡ ኢንዛይም ማሟያ፡ 0.1M የሶዲየም ፎስፌት መፍትሄ (pH 8.0)።
Reagent VI: ታይሮሲን መፍትሄ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ታይሮሲን ከ 0.2 ጋር ይቀልጣል.ኤም ኤች.ሲ.ኤል.
አሰራር
1. 0.5ml reagent I ወደ 37 ℃ ቀድመው ይሞቃሉ፣ 0.5ml የኢንዛይም መፍትሄ ይጨምሩ ፣ በደንብ ይቀላቀሉ እና በ37 ℃ ለ 10 ደቂቃዎች.
2. ምላሹን ለማቆም 1ml reagent II ይጨምሩ፣ በደንብ ይደባለቁ እና ለ 30 ደቂቃዎች መፈልፈሉን ይቀጥሉ።
3. የሴንትሪፉጌት ምላሽ መፍትሄ.
4. 0.5ml supernatant ውሰድ፣ 2.5ml reagent III፣ 0.5ml reagent IV ጨምር፣ በደንብ ተቀላቅል እና በ37℃ለ 30 ደቂቃዎች.
5. ኦ.ዲ660እንደ OD ተወስኗል1;ባዶ ቁጥጥር ቡድን: 0.5ml reagent V ኢንዛይም ለመተካት ጥቅም ላይ ይውላልኦዲትን ለመወሰን መፍትሄ660እንደ ኦ.ዲ2, ΔOD=OD1- ኦዲ2.
6. ኤል-ታይሮሲን መደበኛ ከርቭ፡ 0.5mL የተለያየ ትኩረት ኤል-ታይሮሲን መፍትሄ፣ 2.5mL Reagent III፣ 0.5mL Reagent IV በ 5ml centrifuge tube፣ በ37℃ ውስጥ ለ30mins መክተት፣ ለኦዲ ማግኘቱ660ለተለያዩ የኤል-ታይሮሲን ትኩረት፣ ከዚያም መደበኛውን ጥምዝ Y=kX+b አገኘ፣ Y የ L-tyrosine ትኩረት፣ X OD ነው።600.
ስሌት
2፡ አጠቃላይ የምላሽ መፍትሄ (ሚሊ) መጠን
0.5: የኢንዛይም መፍትሄ (ሚሊ) መጠን
0.5: ምላሽ ፈሳሽ መጠን በ chromogenic ቆራጥነት (ሚሊ)
10፡ የምላሽ ጊዜ (ደቂቃ)
Df: ማቅለጫ ብዜት
Cየኢንዛይም ትኩረት (mg/ml)
ዋቢዎች
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23፡77።
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.ባዮፊስ.ሬስ.ኮምዩን።(1971);44፡513።
3. ሒልዝ፣ ኤች.ወ ዘ ተ.,ኢሮ.ጄ ባዮኬም.(1975);56፡103–108።
4. ሳምብሩክ ጄet አል. ሞለኪውላር ክሎኒንግ፡ የላብራቶሪ መመሪያ፣ 2 ኛ እትም፣ ቀዝቃዛ ስፕሪንግ ወደብየላቦራቶሪ ፕሬስ፣ ቀዝቃዛ ስፕሪንግ ወደብ (1989)።
አሃዞች
ምስል.1 ምርጥ pH
100 ሚሜ ቋት መፍትሄ: pH6.0-8.0, ና-ፎስፌት;pH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5፣ Glycine-NaOH.የኢንዛይም ትኩረት፡1mg/ml
ምስል 2 ምርጥ ሙቀት
ምላሽ በ 20 ሚሜ ኬ-ፎስፌት ቋት pH 8.0.የኢንዛይም ትኩረት: 1 mg / ml
ምስል 3 ፒኤች መረጋጋት
25 ℃, 16 h-ህክምና በ 50 ሚሜ ቋት መፍትሄ: pH 4.5- 5.5, Acetate;ፒኤች 6.0-8.0, ና-ፎስፌት;ፒኤች 8.0-9.0፣ ትሪስ-ኤች.ሲ.ኤል.ፒኤች 9.0-12.5, ግሊሲን-ናኦኤች.የኢንዛይም ትኩረት: 1 mg / ml
ምስል 4 የሙቀት መረጋጋት
የ30 ደቂቃ ህክምና ከ50 ሚሜ Tris-HCl ቋት ፣ pH 8.0 ጋር።የኢንዛይም ትኩረት: 1 mg / ml
ምስል 5 ማከማቻ መረጋጋትty at 25℃
