RT-LAMP የፍሎረንስሰንት ማስተር ድብልቅ
ይህ ምርት ምላሽ ቋት፣ RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymerase and heat-resistant reverse transcriptase)፣ lyophilized Protectants እና ይዟል።ፍሎረሰንትማቅለሚያ ክፍሎች.የምላሽ ቋት Mg2+፣ dNTP እና ሌሎች ለማጉላት አስፈላጊ ክፍሎችን ይዟል።ለመጠቀም፣ ልክ Bufferን፣ ምላሽ ኢንዛይምን፣ ፍሎረሰንት ቀለምን፣ ፕሪመርን በማቀላቀል እና አብነቱን ይጨምሩ፣ lyophilized protectant በመጨመር በቀጥታ መጠቀም ይችላል።ከሊዮፊላይዘር ጋር የተገናኘ እና lyophilized ነበር, እና ጥቅም ላይ ሲውል ፕሪመር እና አብነቶች ብቻ ተጨምረዋል.ይህ reagent ከፍተኛ የማጉላት ብቃት እና ስሜታዊነት አለው።
አካል
| አካል | HCB5205A-01 | HCB5205A-02 | HCB5205A-03 |
| ሉፕ-አማላጅ ማጉላት ቋት። | 1.2 ሚሊ | 4 ሚሊ × 3 | 12 ሚሊ × 10 |
| RT-ኢንዛይሞች ድብልቅ | 245 μl | 2.45 ሚሊ | 2.45 ሚሊ × 10 |
| Lyophilized መከላከያ | 0.96 ሚሊ × 2 | 9.60 ሚሊ × 2 | 9.60 ሚሊ × 20 |
| 25× ቀለም | 192 μL | 0.96 ሚሊ × 2 | 0.96 ሚሊ × 20 |
መተግበሪያዎች
ለዲኤንኤ ወይም አር ኤን ኤ isothermal ማጉያ.
የማከማቻ ሁኔታዎች
በደረቅ በረዶ ተጓጉዟል፣ በ -25 ~ -15 ℃ የተከማቸ።ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ, ምርቱ ለ 12 ወራት ያገለግላል.
ፕሮቶኮል
1.በክፍል ሙቀት ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውለውን የምላሽ ቋት ይቀልጡት።አዙሪት በአጭሩ ወይም በደንብ ለመደባለቅ ብዙ ጊዜ ቱቦዎችን ይገለበጥ፣ ከዚያም ፈሳሹን ወደ ቱቦው ግርጌ ለመሰብሰብ ሴንትሪፉጅ ያድርጉ።
2.የምላሽ ስርዓት ዝግጅት.ይህ ሬጀንት በሁለት የምላሽ ስርዓቶች ማለትም በፈሳሽ ምላሽ ድብልቅ እና በ lyophilized ስርዓት ድብልቅ ሊዘጋጅ ይችላል።
1) ፈሳሽ ምላሽ ድብልቅ ያዘጋጁ
| አካል | ድምጽ |
| ሉፕ-አማላጅ ማጉላት ቋት። | 12.5 ማይልስ |
| 25× ቀለም | 2 μኤል |
| RT-ኢንዛይሞች ድብልቅ | 2.55 ማይልስ |
| 10 × ዋና ድብልቅa | 5 μኤል |
| አብነቶች ዲ ኤን ኤ / አር ኤን ኤ b | × μL |
| ከኑክሌር-ነጻ ውሃ | እስከ 50 μL |
2) የሊዮፊላይዜሽን ስርዓት ድብልቅ
① lyophilized ድብልቅ ያዘጋጁ
| አካል | ድምጽ |
| ሉፕ-አማላጅ ማጉላት ቋት። | 12.5 ማይልስ |
| Lyophilized መከላከያ | 20 μኤል |
| 25× ቀለም | 2 μኤል |
| RT-ኢንዛይሞች ድብልቅ | 2.55 ማይልስ |
| ከኑክሌር-ነጻ ውሃ | እስከ 50 μL |
② Lyophilization: የተዘጋጀው ድብልቅ በ 50μL ስርዓት ውስጥ lyophilized ነበር
③ የምላሽ ድብልቅን ያዘጋጁ
| አካል | ድምጽ |
| Lyophilized ድብልቅ | 1 ቁራጭ |
| 10 × ዋና ድብልቅa | 5 μኤል |
| አብነቶች ዲ ኤን ኤ / አር ኤን ኤ b | × μL |
| ከኑክሌር-ነጻ ውሃ | እስከ 50 μL |
ማስታወሻዎች፡-
1) ሀ.10× ፕሪመር ድብልቅ፡ 16 μM FIP/BIP፣ 2 μM F3/B3፣ 4 μM Loop F/B;
2) ለ.DEPC (ውሃ የሚሟሟ) ለኑክሊክ አሲድ ቴምፕ ይመከራል.
3)የማጉላት ምላሽ፡ የሚከተለውን ፕሮግራም በፍሎረሰንት PCR መሳሪያ (ለምሳሌ ABI7500፣ ወዘተ) ላይ ያዋቅሩ።
| የሙቀት መጠን | ጊዜ | ክበቦች |
| 65 ℃ | 60 ሰከንድ * FAM ፍሎረሰንት ይሰብስቡ | 30 |
ማስታወሻዎች
1.በክፍል ሙቀት ውስጥ በደንብ ለመደባለቅ ጨው በመጠባበቂያው ቱቦ ስር ፣ አዙሪት ለአጭር ጊዜ ሊታይ ይችላል ወይም ቱቦዎች ብዙ ጊዜ ይገለበጣሉ።
2.የምላሽ ሙቀት በ62 ℃ እና 68 ℃ መካከል እንደ ፕሪመርሮች ሁኔታ ማመቻቸት ይቻላል።
3.ሙከራው ደረጃውን የጠበቀ መሆን አለበት, ይህም የምላሽ ስርዓቱን ማዘጋጀት, ሊዮፊላይዜሽን እና ናሙና ማቀናበር እና ናሙና መጨመር ሂደትን ጨምሮ;
4.ብክለትን ለማስወገድ የምላሽ ስርዓቱን እጅግ በጣም ንፁህ በሆነ አግዳሚ ወንበር ላይ ለማዘጋጀት ይመከራል ፣ በሌሎች ውስጥ የውሸት አወንታዊ ጣልቃገብነትን ለማስወገድ አብነቶችን በክፍሉ ጭስ ማውጫ ውስጥ ይጨምሩ።
