2× ሴንሲ ቀጥታ ፕሪሚክስ-ዩኤንጂ (ፕሮቤ qPCR)
የድመት ቁጥር፡ HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ከዲኤንኤ ማውጣት ወይም የናሙና ዝግጅት ሳይደረግ በቀጥታ ፒሲአርን ከናሙናዎች ለመሥራት የተነደፈ ነው።ይህ ሬጀንት ትኩስ ጅምር ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬሴን፣ uracil DNA glycosylase (UNG)፣ RNase Inhibitor፣ MgClን ያካትታል።2, dNTPs (ከ dTTP ይልቅ ከ dUTP ጋር) እና ማረጋጊያዎች፣ ለቁጥር PCR (qPCR)።ይህ reagent ከፍተኛ አጋቾቹን መቻቻልን አስቀድሞ ይፈጥራል፣ እና ስለሆነም እንደ ጉሮሮ በጥጥ፣ ምራቅ፣ ፀረ-የረጋ ያለ ሙሉ ደም፣ ፕላዝማ እና ሴረም ያሉ ናሙናዎችን ከዲኤንኤ ማውጣት በቀጥታ ሊተገበር ይችላል።ሬጀንቱ ለqPCR የባለቤትነት መያዣን ከፀረ-መከላከያ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ እና UNG ኢንዛይም ድብልቅ ኢንዛይሞች ጋር ይጠቀማል።ስለዚህ አጋቾችን በያዙ ናሙናዎች ውስጥ ጥሩ የዒላማ ጂኖችን ማጉላት እና በ PCR ቀሪ እና በአየር ብክለት ምክንያት የሚመጣን የውሸት አወንታዊ ማጉላትን ይከለክላል።ይህ ሪአጀንት ከአብዛኛዎቹ የፍሎረሰንት አሃዛዊ PCR መሳሪያዎች ጋር ተኳሃኝ ነው፣ እንደ አፕሊድ ባዮ ሲስተምስ፣ ኢፔንዶርፍ፣ ባዮ-ራድ፣ ሮቼ እና የመሳሰሉት።
አካላት
1. 50× SensiDirect ኢንዛይም/UNG ድብልቅ
2. 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
የማከማቻ ሁኔታዎች
ሁሉም ክፍሎች በ -20 ℃ ለረጅም ጊዜ ማከማቻ እና 4℃ እስከ 3 ወር ድረስ መቀመጥ አለባቸው።እባክዎን ከቀለጠ በኋላ በደንብ ይቀላቀሉ እና ከመጠቀምዎ በፊት ሴንትሪፉል ያድርጉ።ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ.
የብስክሌት ፕሮቶኮል
| ደረጃ | የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደት |
| የምግብ መፈጨት | 50℃ | 2ደቂቃ | 1 |
| ፖሊሜሬዝ ማግበር | 95 ℃ | 1-5 ደቂቃ | 1 |
| ዲናቸር | 95 ℃ | 10-20 ሴ | 40-50 |
| ማሰር/ማራዘሚያ | 56-64℃ | ከ20-60ዎቹ |
የቧንቧ መስመር መመሪያዎች
| ሬጀንት | የድምጽ መጠን በ ምላሽ | መጠን በአንድ ምላሽ | የመጨረሻ ትኩረት |
| 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µ ሊ | 25µ ሊ | 1× |
| 50× SensiDirect ኢንዛይም/UNG ድብልቅ | 0.5µL | 1µ ሊ | 1× |
| 25× ፕሪመር-ፕሮብ ድብልቅ1፣2 | 1µ ሊ | 2µ ሊ | 1× |
| ናሙና3፣4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| ጠቅላላ መጠን | 25 μኤል | 50 μኤል | - |
1. የፕሪመር የመጨረሻው ትኩረት አብዛኛውን ጊዜ 0.2μM ነው.ለተሻለ ውጤት, የፕሪሚየር ትኩረትን በ 0.2-1μM ክልል ውስጥ ማመቻቸት ይቻላል.
2. በአጠቃላይ የፍተሻ ክምችት በ 0.1-0.3μM ክልል ውስጥ ማመቻቸት ይቻላል.በጣም ጥሩው የመርማሪው ትኩረት ከእውነተኛ ጊዜ PCR ማጉያ መሣሪያ ፣ የፍተሻ ዓይነት እና የፍሎረሰንት መለያ ንጥረ ነገር ዓይነት ጋር ይዛመዳል።እባክዎን የመሳሪያውን መመሪያ ወይም የእያንዳንዱን የፍሎረሰንት መፈተሻ ልዩ መስፈርቶች ይመልከቱ።
3. የተለያዩ የናሙና ዓይነቶች የተለያዩ ዓይነቶችን እና የአነቃቂዎችን ይዘት እና የዒላማ ጂን ቅጂ ቁጥር ይይዛሉ።የናሙና መጠኑ በትክክለኛ ሁኔታ ግምት ውስጥ መግባት አለበት.አስፈላጊ ከሆነ ከኒውክለስ-ነጻ ውሃ ወይም TE Buffer በማከል የናሙናውን ፈሳሽ ያድርጉ።
4. የተመከሩ የተለያዩ ናሙናዎች መጠን፡-
| ናሙና | መጠን ለአንድ 50 μL ምላሽ | ከፍተኛ ጥምርታ |
| ፀረ-coagulated ሙሉ ደም | 2.5 ማይልስ | 5% |
| ፕላዝማ | 15 μኤል | 30% |
| ሴረም | 10 μኤል | 20% |
| የጉሮሮ መቁሰል | 10 μኤል | 20% |
| ምራቅ | 10 μኤል | 20% |
የጥራት ቁጥጥር
1. የተግባር ማወቂያ፡ ስሜታዊነት፣ ልዩነት እና የqPCR ተደጋጋሚነት።
2. ምንም ውጫዊ የኒውክሊየስ እንቅስቃሴ የለም: ምንም ውጫዊ ኢንዶኑክለስ እና ኤክሰኒዩስ ብክለት የለም.
የምርት ማስታወሻዎች
1. ይህ ምርት ከ1-5 ደቂቃ ውስጥ ሊነቃ የሚችል አዲስ የሙቅ ጅምር ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴን ይጠቀማል።የሱ ምላሽ ቋት ስለተመቻቸ፣የመመርመሪያ ዘዴን በመጠቀም ለድርብ ወይም ለብዙ ፍሎረሰንት መጠናዊ PCR የበለጠ ተስማሚ ነው።
2. የ PCR ማጉያው የ Rn ዋጋ በጣም ዝቅተኛ ከሆነ ወይም ማጉሊያው በግልጽ ከተከለከለ የናሙና መጠኑን በመቀነስ የምላሽ መጠን መጨመር ወይም የናሙና ቀደምት ማቅለጥ ውጤቱን ሊያሻሽል ይችላል።
3. የደም, ምራቅ, ሽንት, የጉሮሮ መቁሰል, ወዘተ መሰብሰብ የክሊኒካዊ መስፈርቶችን መከተል አለበት, እና ትኩስ ናሙና የኑክሊክ አሲድ መበላሸትን ለመከላከል ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.
4. የተለያዩ አምፖሎች ለDUTP የተለያዩ የመጠቀም ቅልጥፍና እና ለ UNG ስሜታዊነት ስላላቸው የዩኤንጂ ሲስተሙን ሲጠቀሙ የመለየት ስሜቱ ከቀነሰ ሬጀንቶቹ ማመቻቸት አለባቸው።ካስፈለገ ለቴክኒክ ድጋፍ እባክዎ ያነጋግሩን።
5. የተጓጓዥ PCR ምርቶችን በአንድ-ደረጃ ምላሽ መካከል ያለውን ማጉላት ለማስቀረት የተወሰነ የሙከራ ቦታ እና ፒፔት ለማጉላት ያስፈልጋል።በጓንት ይሰሩ እና ብዙ ጊዜ ይቀይሩ እና ከ PCR ማጉላት በኋላ የምላሽ ቱቦን አይክፈቱ።
