የቫይራል ዲ ኤን ኤ/ኤን ኤ ኤክስትራክሽን ኪት
ይህ ኪት እንደ ናሶፍፊሪያንክስ ስዋቦች፣ የአካባቢ ስዋቦች፣ የሕዋስ ባህል ሱፐርናታንት እና ቲሹ ሆሞጋኔት ሱፐርናታንትስ ካሉ ከፍተኛ ንፅህና ያለው የቫይረስ ዲ ኤን ኤ/ኤንኤን በፍጥነት ለማውጣት ተስማሚ ነው።ኪቱ በሲሊካ ሽፋን የማጥራት ቴክኖሎጂ ላይ የተመሰረተ ሲሆን ይህም የፌኖል/ክሎሮፎርም ኦርጋኒክ መሟሟትን ወይም ጊዜ የሚወስድ የአልኮሆል ዝናብን በመጠቀም ከፍተኛ ጥራት ያለውን የቫይራል ዲ ኤን ኤ/ኤንኤ ማውጣትን አስፈላጊነት ያስወግዳል።የተገኙት ኑክሊክ አሲዶች ከቆሻሻ የፀዱ እና እንደ ተቃራኒ ቅጂ፣ PCR፣ RT-PCR፣ የእውነተኛ ጊዜ PCR፣ የቀጣይ ትውልድ ቅደም ተከተል (ኤንጂኤስ) እና ሰሜናዊ ብሎት ባሉ የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ውስጥ ለመጠቀም ዝግጁ ናቸው።
የማከማቻ ሁኔታዎች
በ 15 ~ 25 ℃ ያከማቹ እና በክፍል ሙቀት ያጓጉዙ
አካላት
| አካላት | 100RXNS |
| ቋት VL | 50 ሚሊ ሊትር |
| ቋት RW | 120 ሚሊ ሊትር |
| ከአርናሴ-ነጻ ddH2 O | 6 ml |
| FastPure አር ኤን ኤ አምዶች | 100 |
| የስብስብ ቱቦዎች (2ml) | 100 |
| ከአርናሴ-ነጻ የስብስብ ቱቦዎች (1 .5ml) | 100 |
ቋት VL፡ለሊሲስ እና ለማሰር አካባቢን ይስጡ.
ቋት RW፡ቀሪ ፕሮቲኖችን እና ሌሎች ቆሻሻዎችን ያስወግዱ.
ከአርናስ-ነጻ ddH2O፡በአከርካሪው አምድ ውስጥ ካለው ሽፋን ኤሌት ዲ ኤን ኤ/ኤን.ኤን.
FastPure አር ኤን ኤ አምዶችበተለይ ዲ ኤን ኤ/ኤን.ኤን.
የስብስብ ቱቦዎች 2 ml;ማጣሪያን ሰብስብ።
ከ RNase-ነጻ የመሰብሰቢያ ቱቦዎች 1.5 ml;ዲ ኤን ኤ/ኤንኤን ሰብስብ።
መተግበሪያዎች
Nasopharyngeal swabs, የአካባቢ swabs, ሕዋስ ባህል supernatants እና ቲሹ homogenate supernatants.
በራሱ የተዘጋጀ ማተርኢልስ
ከRNase-ነጻ pipette ጠቃሚ ምክሮች፣ 1.5 ሚሊር ከአርናሴ-ነጻ ሴንትሪፉጅ ቱቦዎች፣ ሴንትሪፉጅ፣ vortex mixer እና pipettes።
የሙከራ ሂደት
በባዮሴፍቲ ካቢኔ ውስጥ ሁሉንም የሚከተሉትን እርምጃዎች ያከናውኑ።
1. የናሙናውን 200 μl ከ RNase-ነጻ ሴንትሪፉጅ ቱቦ (በፒቢኤስ ወይም 0.9% NaCl በቂ ናሙና ከሌለ) ይጨምሩ፣ 500 μl Buffer VL ይጨምሩ፣ ለ 15 - 30 ሰከንድ በማወዛወዝ በደንብ ይደባለቁ እና ሴንትሪፉጅ በቧንቧው ስር ያለውን ድብልቅ ለመሰብሰብ በአጭሩ.
2. FastPure RNA አምዶችን በክምችት ቱቦዎች ውስጥ ያስቀምጡ 2 ml.ድብልቁን ከደረጃ 1 ወደ FastPure አር ኤን ኤ አምዶች ያስተላልፉ ፣ ሴንትሪፉጅ በ 12,000 ራፒኤም (13,400 × g) ለ 1 ደቂቃ እና ማጣሪያውን ያስወግዱት።
3. 600 μl Buffer RW ወደ FastPure አር ኤን ኤ አምዶች ይጨምሩ፣ ሴንትሪፉጅ በ12,000 ሩብ ደቂቃ (13,400 × g) ለ30 ሰከንድ እና ማጣሪያውን ያስወግዱት።
4. ደረጃ 3 ን ይድገሙት.
5. ባዶውን አምድ በ 12,000 ራፒኤም (13,400 × g) ለ 2 ደቂቃ ያርቁ።
6. የFastPure RNA አምዶችን በጥንቃቄ ወደ አዲስ አርናሴ-ነጻ የመሰብሰቢያ ቱቦዎች 1.5 ml (በኪቱ ውስጥ የቀረቡ) ያስተላልፉ እና ዓምዱን ሳይነኩ 30 - 50 μl RNase-ነጻ ddH2O ወደ ሽፋኑ መሃከል ይጨምሩ።በክፍል ሙቀት ውስጥ ለ 1 ደቂቃ እና ሴንትሪፉጅ በ 12,000 ራፒኤም (13,400 × g) ለ 1 ደቂቃ እንዲቆም ይፍቀዱ.
7. FastPure RNA አምዶችን አስወግድ።ዲኤንኤ/ኤንኤን ለቀጣይ ምርመራዎች በቀጥታ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፣ ወይም በ -30~ -15°C ለአጭር ጊዜ ወይም -85 ~-65°C ረዘም ላለ ጊዜ ይከማቻል።
ማስታወሻዎች
ለምርምር ብቻ ጥቅም ላይ ይውላል.በምርመራ ሂደቶች ውስጥ ጥቅም ላይ አይውልም.
1. ናሙናዎችን ወደ ክፍል የሙቀት መጠን አስቀድመው ማመጣጠን.
2. ቫይረሶች በጣም ተላላፊ ናቸው።እባክዎ ከሙከራው በፊት ሁሉም አስፈላጊ የደህንነት ጥንቃቄዎች መደረጉን ያረጋግጡ።
3. ናሙናውን ደጋግሞ ከማቀዝቀዝ እና ከመቅለጥ ይቆጠቡ፣ ይህም ወደ መበስበስ ወይም የተወሰደው የቫይረስ ዲ ኤን ኤ/ኤን ኤ ምርት እንዲቀንስ ሊያደርግ ይችላል።
4. በራሳቸው የተዘጋጁ መሳሪያዎች ከአርናሴ-ነጻ የ pipette ምክሮች፣ 1.5 ml RNase-free centrifuge tubes፣ centrifuge፣ vortex mixer እና pipettes ያካትታሉ።
5. ኪቱን በሚጠቀሙበት ጊዜ የላብራቶሪ ኮት፣ ሊጣሉ የሚችሉ የላቲክ ጓንቶች፣ እና የሚጣሉ ጭንብል ይልበሱ እና RNaseን የመበከል አደጋን ለመቀነስ ከ RNase-ነጻ ፍጆታዎችን ይጠቀሙ።
6. ካልሆነ በስተቀር ሁሉንም እርምጃዎች በቤት ሙቀት ውስጥ ያከናውኑ.
ሜካኒዝም እና የስራ ፍሰት
