M-MLV የተገላቢጦሽ ግልባጭ

RevScript Reverse transcriptase የሚገኘው በጄኔቲክ ምህንድስና ቴክኖሎጂ ነው።ከፍተኛ የሲዲኤንኤ ውህደት ችሎታ፣ የሙቀት መረጋጋት እና የምላሽ ሙቀት ገደብ (እስከ 60 ° ሴ) አለው።የተቀናጀው የሲዲኤንኤ ምርት እስከ 10 ኪ.ቢ.የአብነቶችን ተያያዥነት ያጠናክራል እና ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ወይም ዝቅተኛ ቅጂ ጂኖች ያላቸውን አር ኤን ኤ አብነቶችን በግልባጭ ለመቅዳት ተስማሚ ነው።

አካላት

የማከማቻ ሁኔታ

ይህ ምርት በ -25 ° C ~ -15 ° ሴ ለ 2 ዓመታት መቀመጥ አለበት.

የክፍል ፍቺ

አንድ ክፍል 1 nmol dTTP በ 10 ደቂቃ ውስጥ በ 37 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ በአሲድ የማይሟሟ ቁስ ውስጥ ኦሊጎ (ዲቲ) እንደ ፕሪመር በመጠቀም ያካትታል።

ምላሽ ማዋቀር

1.የአር ኤን ኤ አብነት መከልከል (ይህ እርምጃ እንደ አማራጭ ነው፣ የአር ኤን ኤ አብነት መነጠል ሁለተኛ ደረጃ አወቃቀሮችን ለመክፈት ይረዳል፣ ይህም የመጀመሪያውን ሲዲኤንኤ ምርትን ያሻሽላል።)

ማስታወሻዎች፡- 

1) ሀ፡ ጠቅላላ አር ኤን ኤ፡ 1-5 ug ወይም mRNA፡ 1-500 ng

2) በ 65 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 5 ደቂቃዎች በማብቀል, ከዚያም በበረዶ ላይ ወዲያውኑ ለ 2 ደቂቃዎች እንዲቀዘቅዝ ያድርጉ.የምላሽ ፈሳሽ ለመሰብሰብ አጭር ሴንትሪፉግ ፣ በሚከተለው ሠንጠረዥ ላይ እንደሚታየው የተገላቢጦሽ ግልባጭ ምላሽ መፍትሄ ይጨምሩ።ለመደባለቅ ቀስ ብሎ pipette.

1.የምላሽ ድብልቅ ዝግጅት (20 μL መጠን)

 1.በሚከተሉት ሁኔታዎች ምላሹን ያከናውኑ:

ማስታወሻዎች፡-

1) ሀ.በ 25 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 5 ደቂቃዎች መፈልፈፍ የሚያስፈልገው በዘፈቀደ ሄክሳመሮችን ለመጠቀም ብቻ ነው።እባክዎ ኦሊጎ (ዲቲ) ሲጠቀሙ ይህንን ደረጃ ይዝለሉት።₁₈ወይም Gene Specific Primer.

2) ለ.የሚመከረው የተገላቢጦሽ የሙቀት መጠን 42°C ነው፣ ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅሮች ወይም ከፍተኛ የጂሲሲ ይዘት ላላቸው አብነቶች፣ የምላሽ ሙቀትን ወደ 50-55°ሴ ከፍ ለማድረግ ይመከራል።

3) ሐ.የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትስን ለማንቃት በ85°ሴ ለ 5ደቂቃዎች ማሞቅ።

4) ምርቱ በቀጥታ በ PCR ወይም qPCR ምላሾች ውስጥ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል ወይም በ -20 ° ሴ ለአጭር ጊዜ ማከማቻ ይከማቻል።ለረጅም ጊዜ ማከማቻ ምርቶቹን በማስተካከል እና በ -80 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ማከማቸት ይመከራል.ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ.

5) ምርቱ ለአንድ-ደረጃ RT-qPCR ተስማሚ ነው, ለእያንዳንዱ 25μL ምላሽ ስርዓት 10-20 U reverse transcriptase ለመጨመር ይመከራል ወይም ቀስ በቀስ በተጨባጭ ሁኔታ መሰረት የተገላቢጦሽ መጠን ይጨምራል.

ማስታወሻዎች

1.እባክዎን የሙከራ ቦታውን ንጹህ ያድርጉት;በሚሠራበት ጊዜ ንጹህ ጓንቶች እና ጭምብሎች መደረግ አለባቸው.በሙከራው ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁሉም የፍጆታ እቃዎች የ RNase ብክለትን ለመከላከል ከ RNase ነጻ መሆን አለባቸው.

2.የአር ኤን ኤ መበላሸትን ለመከላከል ሁሉም ሂደቶች በበረዶ ላይ መከናወን አለባቸው.

3.የተገላቢጦሽ ግልባጭ ከፍተኛ ቅልጥፍናን ለማረጋገጥ ከፍተኛ ጥራት ያላቸው አር ኤን ኤ ናሙናዎች ይመከራሉ።

4.ይህ ምርት ለምርምር ብቻ ጥቅም ላይ ይውላል.

5.እባክዎን ለደህንነትዎ ሲባል የላብራቶሪ ኮት እና የሚጣሉ ጓንቶችን ይጠቀሙ።