M-MLV የተገላቢጦሽ ግልባጭ
RevScript Reverse transcriptase የሚገኘው በጄኔቲክ ምህንድስና ቴክኖሎጂ ነው።ከፍተኛ የሲዲኤንኤ ውህደት ችሎታ፣ የሙቀት መረጋጋት እና የምላሽ ሙቀት ገደብ (እስከ 60 ° ሴ) አለው።የተቀናጀው የሲዲኤንኤ ምርት እስከ 10 ኪ.ቢ.የአብነቶችን ተያያዥነት ያጠናክራል እና ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ወይም ዝቅተኛ ቅጂ ጂኖች ያላቸውን አር ኤን ኤ አብነቶችን በግልባጭ ለመቅዳት ተስማሚ ነው።
አካላት
| አካል | HCበ2003 ዓ.ም-01 (10,000U) | HCበ2003 ዓ.ም-02 (5*10,000U) | HCበ2003 ዓ.ም-03 (200,000U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μኤል | 5×50 μኤል | 1 ሚሊ |
| 5 × RevScript Buffer | 250 μል | 1.25 ሚሊ | 5 ሚሊ |
የማከማቻ ሁኔታ
ይህ ምርት በ -25 ° C ~ -15 ° ሴ ለ 2 ዓመታት መቀመጥ አለበት.
የክፍል ፍቺ
አንድ ክፍል 1 nmol dTTP በ 10 ደቂቃ ውስጥ በ 37 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ በአሲድ የማይሟሟ ቁስ ውስጥ ኦሊጎ (ዲቲ) እንደ ፕሪመር በመጠቀም ያካትታል።
ምላሽ ማዋቀር
አር ኤን ኤ አብነት 1.Denaturation (ይህ እርምጃ አማራጭ ነው, አር ኤን ኤ አብነት denaturation ሁለተኛ ደረጃ መዋቅሮች ለመክፈት ይረዳል, ይህም የመጀመሪያው ስትራንድ cDNA ምርት ያሻሽላል.)
| አካላት | መጠን (μL) |
| RNase ነጻ ddH2O | ወደ 13 |
| ኦሊጎ(ዲቲ)18 (50 μሞል/ሊ) ወይም የዘፈቀደ ፕሪመር (50 μሞል/ሊ) ወይም የጂን ልዩ ፕሪመርስ (2 μሞል/ሊ) | 1 |
| ወይም 1 | |
| ወይም 1 | |
| አር ኤን ኤ አብነት | Xa |
ማስታወሻዎች፡-
1) ሀ፡ ጠቅላላ አር ኤን ኤ፡ 1-5 ug ወይም mRNA፡ 1-500 ng
2) በ 65 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 5 ደቂቃዎች በማብቀል, ከዚያም በበረዶ ላይ ወዲያውኑ ለ 2 ደቂቃዎች እንዲቀዘቅዝ ያድርጉ.የምላሽ ፈሳሽ ለመሰብሰብ አጭር ሴንትሪፉግ ፣ በሚከተለው ሠንጠረዥ ላይ እንደሚታየው የተገላቢጦሽ ግልባጭ ምላሽ መፍትሄ ይጨምሩ።ለመደባለቅ ቀስ ብሎ pipette.
1. የምላሽ ድብልቅ ዝግጅት (20 μL መጠን)
| አካላት | መጠን (μL) |
| የቀደመው ደረጃ ድብልቅ | 13 |
| 5× ቋት | 4 |
| dNTP ቅልቅል (10nmol/L) | 1 |
| የተገላቢጦሽ ግልባጭ (200 U/μL) | 1 |
| አር ናስ መከላከያ (40 U/μL) | 1 |
1.በሚከተሉት ሁኔታዎች ምላሹን ያከናውኑ:
| የሙቀት መጠን (° ሴ) | ጊዜ |
| 25 ° ሴa | 5 ደቂቃ |
| 42 ° ሴb | 15-30 ደቂቃዎች |
| 85 ° ሴc | 5 ደቂቃ |
ማስታወሻዎች፡-
1) ሀ.በ 25 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 5 ደቂቃዎች መፈልፈፍ የሚያስፈልገው በዘፈቀደ ሄክሳመሮችን ለመጠቀም ብቻ ነው።እባክዎ ኦሊጎ (ዲቲ) ሲጠቀሙ ይህንን ደረጃ ይዝለሉት።18ወይም Gene Specific Primer.
2) ለ.የሚመከረው የተገላቢጦሽ የሙቀት መጠን 42°C ነው፣ ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅሮች ወይም ከፍተኛ የጂሲሲ ይዘት ላላቸው አብነቶች፣ የምላሽ ሙቀትን ወደ 50-55°ሴ ከፍ ለማድረግ ይመከራል።
3) ሐ.የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትስን ለማንቃት በ85°ሴ ለ 5ደቂቃዎች ማሞቅ።
4) ምርቱ በቀጥታ በ PCR ወይም qPCR ምላሾች ውስጥ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል ወይም በ -20 ° ሴ ለአጭር ጊዜ ማከማቻ ይከማቻል።ለረጅም ጊዜ ማከማቻ ምርቶቹን በማስተካከል እና በ -80 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ማከማቸት ይመከራል.ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ.
5) ምርቱ ለአንድ-ደረጃ RT-qPCR ተስማሚ ነው, ለእያንዳንዱ 25μL ምላሽ ስርዓት 10-20 U reverse transcriptase ለመጨመር ይመከራል ወይም ቀስ በቀስ በተጨባጭ ሁኔታ መሰረት የተገላቢጦሽ መጠን ይጨምራል.
ማስታወሻዎች
1.እባክዎን የሙከራ ቦታውን ንጹህ ያድርጉት;በሚሠራበት ጊዜ ንጹህ ጓንቶች እና ጭምብሎች መደረግ አለባቸው.በሙከራው ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ ሁሉም የፍጆታ እቃዎች የ RNase ብክለትን ለመከላከል ከ RNase ነጻ መሆን አለባቸው.
2. ሁሉም ሂደቶች የ RNA መበላሸትን ለመከላከል በበረዶ ላይ መከናወን አለባቸው.
የተገላቢጦሽ ግልባጭ ከፍተኛ ውጤታማነትን ለማረጋገጥ 3.High ጥራት ያለው አር ኤን ኤ ናሙናዎች ይመከራሉ።
4.ይህ ምርት ለምርምር ብቻ ጥቅም ላይ ይውላል.
5.እባክዎ ለደህንነትዎ ሲባል በላብራቶሪ ኮት እና በሚጣሉ ጓንቶች ይጠቀሙ።
