ፕሮቲን K NGS (ዱቄት)
የድመት ቁጥር፡ HC4507A
NGS Protease K ከፍተኛ ኢንዛይም እንቅስቃሴ እና ሰፊ substrate specificity ያለው የተረጋጋ serine protease ነው.The ኢንዛይም ይመረጣል ester ቦንድ እና peptide ቦንዶች hydrophobic አሚኖ አሲዶች ሲ-ተርሚናል አጠገብ ይበሰብሳል, ሰልፈር-የያዙ አሚኖ አሲዶች እና መዓዛ አሚኖ አሲዶች.ስለዚህ, ብዙውን ጊዜ ፕሮቲኖችን ወደ አጭር peptides ለመቀነስ ያገለግላል.NGS Protease K ከአስፕ ጋር የተለመደ የሴሪን ፕሮቲን ነው39- የእሱ69- ሰር224ለሴሪን ፕሮቲሊስስ ልዩ የሆነው ካታሊቲክ ትሪአድ፣ እና የካታሊቲክ ማዕከሉ በመጎተት Ca የተከበበ ነው።2+የማረጋጊያ ቦታዎችን ለማረጋጋት, ከፍተኛ የኢንዛይም እንቅስቃሴን በተለያዩ ሁኔታዎች ውስጥ ማቆየት.
ዝርዝር መግለጫ
| መልክ | ከነጭ-ነጭ-ነጭ-አሞራፊክ ዱቄት ፣ lyophilized |
| የተወሰነ እንቅስቃሴ | ≥40U/mg ጠንካራ |
| ዲናሴ | ምንም አልተገኘም። |
| RNase | ምንም አልተገኘም። |
| ባዮበርደን | ≤50CFU/ጂ ጠንካራ |
| ኑክሊክ አሲድ ቅሪት | <5pg/mg ጠንካራ |
ንብረቶች
| ምንጭ | Tritirachium አልበም |
| EC ቁጥር | 3.4.21.64(ዳግመኛ ከትሪቲራቺየም አልበም) |
| ሞለኪውላዊ ክብደት | 29kDa (ኤስዲኤስ-ገጽ) |
| አይዞኤሌክትሪክ ነጥብ | 7.81 ምስል 1 |
| ምርጥ ፒኤች | 7.0-12.0 (ሁሉም ከፍተኛ እንቅስቃሴን ያከናውናሉ) ምስል 2 |
| ምርጥ ሙቀት | 65℃ ምስል 3 |
| ፒኤች መረጋጋት | ፒኤች 4.5-12.5 (25 ℃,16 ሰ) ምስል 4 |
| የሙቀት መረጋጋት | ከ50℃ በታች (pH 8.0፣ 30min) ምስል.5 |
| የማከማቻ መረጋጋት | በ 25 ℃ ለ 12 ወራት ተከማችቷል ምስል 6 |
| አንቀሳቃሾች | SDS, ዩሪያ |
| ማገጃዎች | Diisopropyl fluorophosphate;ቤንዚልሰልፎኒል ፍሎራይድ |
የማከማቻ ሁኔታዎች
lyophilized ዱቄት በ -25 ~ -15 ℃ ውስጥ ለረጅም ጊዜ ከብርሃን ርቆ ያከማቹ;ከሟሟ በኋላ፣ ከብርሃን ወይም ከረጅም ጊዜ ማከማቻ -25~-15 ℃ ላይ ለአጭር ጊዜ ማከማቻ በ2-8℃ ላይ ወደ ተገቢው መጠን ይግቡ።
ቅድመ ጥንቃቄዎች
ሲጠቀሙ ወይም ሲመዘኑ የመከላከያ ጓንቶችን እና መነጽሮችን ይልበሱ እና ከተጠቀሙ በኋላ በደንብ አየር እንዲዘጉ ያድርጉ።ይህ ምርት የቆዳ አለርጂዎችን እና ከባድ የአይን ብስጭት ሊያስከትል ይችላል.ከተነፈሰ አለርጂ ወይም አስም ምልክቶች ወይም የመተንፈስ ችግር ሊያስከትል ይችላል።የመተንፈስ ችግር ሊያስከትል ይችላል.
የክፍል ትርጉም
አንድ የ NGS Protease K ክፍል በመደበኛ የመወሰን ሁኔታዎች ውስጥ ኬዝይንን ወደ 1 ማይክሮሞል ኤል-ታይሮሲን ሃይድሮላይዝ ለማድረግ የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን ይገለጻል።
Reagents ዝግጅት
| ሬጀንት | አምራች | ካታሎግ |
| ኬዝ ቴክኒካልከከብት ወተት | ሲግማ አልድሪች | ሲ7078 |
| ናኦህ | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| ናህ2PO4· 2ኤች2O | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 20040718 እ.ኤ.አ |
| ና2HPO4 | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 20040618 እ.ኤ.አ |
| ትሪክሎሮአክቲክ አሲድ | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| ሶዲየም አሲቴት | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| አሴቲክ አሲድ | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| ኤች.ሲ.ኤል | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| ሶዲየም ካርቦኔት | ሲኖፋርም ኬሚካልReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| ፎሊን-ፊኖል | ሳንጎን ባዮቴክ (ሻንጋይ)Co., Ltd. | አ500467-0100 |
| ኤል-ታይሮሲን | ሲግማ | 93829 እ.ኤ.አ |
ሬጀንት I፡
ንጥረ ነገር: 1% Casein ከከብት ወተት መፍትሄ: 1 g የከብት ወተት ኬሲን በ 50ml 0.1M የሶዲየም ፎስፌት መፍትሄ, pH 8.0, በውሃ መታጠቢያ ውስጥ በ 65-70 ° ሴ ለ 15mins ሙቀት, ቀስቅሰው እና ሟሟ, በውሃ ማቀዝቀዝ, በተስተካከለው. ሶዲየም ሃይድሮክሳይድ ወደ ፒኤች 8.0, እና ወደ 100 ሚሊር ውስጥ ይቀንሱ.
ሬጀንት II፡
የቲሲኤ መፍትሄ: 0.1M trichloroacetic acid, 0.2M sodium acetate እና 0.3M አሴቲክ አሲድ (1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL አሴቲክ አሲድ ይመዝኑ, 50mL የተዳከመ ውሃ ይጨምሩ, ከ HCl 0 እስከ 4.3H diionized ውሃ ያስተካክሉ. 100 ሚሊ ሊትር).
ሬጀንት III፡
0.4m የሶዲየም ካርቦኔት መፍትሄ (4.24g anhydrous sodium ካርቦኔት ይመዝናል እና በ100ml ውሃ ውስጥ ይቀልጣል)
ሬጀንት IV፡
Folin phenol reagent: 5 ጊዜ በዲዮኒዝድ ውሃ ይቀንሱ.
ሬጀንት ቪ፡
ኢንዛይም ማሟያ: 0.1 M ሶዲየም ፎስፌት መፍትሄ, pH 8.0.
ሬጀንት VI፡
የኤል-ታይሮሲን መደበኛ መፍትሄ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol / ml L-tyrosine ከ 0.2M HCl ጋር ይቀልጣል.
አሰራር
1. UV-Vis spectrophotometer ያብሩ እና የፎቶሜትሪክ መለኪያን ይምረጡ።
2. የሞገድ ርዝመቱን እንደ 660nm ያዘጋጁ።
3. የውሃ መታጠቢያውን ያብሩ, የሙቀት መጠኑን ወደ 37 ℃ ያዘጋጁ, የሙቀት መጠኑ ለ 3-5 ደቂቃዎች እንዳልተለወጠ ያረጋግጡ.
4. 0.5ml substrate በ 2ml centrifuge tube ውስጥ በ37℃ የውሃ መታጠቢያ ገንዳ ውስጥ ለ10 ደቂቃ ቀድመው ያሞቁ።
5. 0.5mL የተበረዘ የኢንዛይም መፍትሄ በቅድመ-ማሞቅ ሴንትሪፉጅ ቱቦ ውስጥ ለ 10 ደቂቃዎች ያውጡ።የኢንዛይም ማሟያ እንደ ባዶ ቡድን ያዘጋጁ።
6. ምላሽ ከተሰጠ በኋላ ወዲያውኑ 1.0 ሚሊ ሊትር TCA reagent ይጨምሩ.በደንብ ይደባለቁ እና ለ 30 ደቂቃዎች በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ይቅቡት.
7. የሴንትሪፉጌት ምላሽ መፍትሄ.
8. በተጠቀሰው ቅደም ተከተል የሚከተሉትን ክፍሎች ይጨምሩ.
| ሬጀንት | ድምጽ |
| ሱፐርናታንት | 0.5 ሚሊ |
| 0.4M ሶዲየም ካርቦኔት | 2.5 ሚሊ |
| Folin phenol reagent | 0.5 ሚሊ |
9. በውሃ መታጠቢያ ውስጥ በ 37 ℃ ውስጥ ለ 30 ደቂቃዎች ከመፍቀዱ በፊት በደንብ ይቀላቀሉ.
10. ኦ.ዲ660እንደ OD ተወስኗል1;ባዶ ቁጥጥር ቡድን፡ ኢንዛይም ማሟያ ኦዲን ለመወሰን የኢንዛይም መፍትሄን ለመተካት ይጠቅማል660እንደ ኦ.ዲ2, ΔOD=OD1- ኦዲ2.
11. ኤል-ታይሮሲን መደበኛ ከርቭ፡ 0.5mL የተለያየ ትኩረት ኤል-ታይሮሲን መፍትሄ፣ 2.5mL 0.4M Sodium carbonate፣ 0.5mL Folin phenol reagent በ 5ml centrifuge tube ውስጥ፣ በ37℃ ለ 30mins መክተት፣ ለ OD መለየት660ለተለያዩ የኤል-ታይሮሲን ትኩረት ፣ ከዚያ መደበኛውን ጥምዝ Y=kX+b አገኘ ፣ Y የ L-tyrosine ትኩረት ሲሆን ፣ X OD ነው600.
ስሌት
2፡ አጠቃላይ የምላሽ መፍትሄ (ሚሊ) መጠን
0.5: የኢንዛይም መፍትሄ (ሚሊ) መጠን
0.5: ምላሽ ፈሳሽ መጠን በ chromogenic ቆራጥነት (ሚሊ)
10፡ የምላሽ ጊዜ (ደቂቃ)
Df: ማቅለጫ ብዜት
Cየኢንዛይም ትኩረት (mg/ml)
አሃዞች
ምስል 1 የዲኤንኤ ቅሪት
| ናሙና | አቬኑ C4 | ኑክሊክ አሲድ ማገገም(pg/mg) | ማገገም(%) | ጠቅላላ ኒውክሊክ አሲድ ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| አር ኤን ኤ-ነጻ H2O | አልተወሰነም። | - | - | - |
ምስል 2 ምርጥ ፒኤች
ምስል 3 ምርጥ ሙቀት
ምስል 4 ፒኤች መረጋጋት
ምስል 5 የሙቀት መረጋጋት
ምስል 6 የማከማቻ መረጋጋት በ 25 ℃
