የሙቀት ስሜታዊ UNG
የሙቀት ሴንሲቲቭ UNG (TS-UNG) የሚገኘው በ ኢ. ኮላይ ውስጥ በእንደገና አገላለጽ ነው።ኢንዛይሙ ነፃ ዩራሲልን ከዩራሲል ከያዘ ነጠላ እና ባለ ሁለት ገመድ ዲ ኤን ኤ እንዲለቀቅ ያደርጋል እና በአር ኤን ኤ ላይ ምንም እንቅስቃሴ የለውም።ከተለመደው የዩኤንጂ ኢንዛይም የኢ.ኮሊ ጂን ኤንዛይም ጋር ሲነጻጸር፣ TS-UNG ኢንዛይም በዝቅተኛ የሙቀት መጠን (20℃~37℃) ከፍተኛ እንቅስቃሴ ያለው እና የሙቀት መጠንን የሚነካ እና በቀላሉ የማይነቃነቅ (50℃) ሲሆን ይህም dUTP-የያዘ ማጉላትን ከመበላሸት ይቆጠባል። የተለመደው የዩኤንጂ ኢንዛይም ከነቃ በኋላ ሊቆይ በሚችለው ቀሪ እንቅስቃሴ በክፍል ሙቀት ውስጥ ያሉ ምርቶች።ስለዚህ፣ TS-UNG ኢንዛይም ለ PCR ብክለት መከላከል ምላሽ ብቻ ሳይሆን ከ RT-PCR የማጉላት ፕሮግራም ጋር በጥሩ ሁኔታ የሚዛመድ እና በ RT-PCR ብክለት መከላከል ምላሽ ላይም ሊያገለግል ይችላል።
የሚመከር መተግበሪያ
የብክለት መከላከያ ማጉላት
የማከማቻ ሁኔታ
-20 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ለረጅም ጊዜ ማከማቻነት, ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ መቀላቀል አለበት, ብዙ ጊዜ ቅዝቃዜን ያስወግዱ.
የማከማቻ ቋት
20 ሚሜ Tris-HCl (pH 7.5), 100 ሚሜ NaCl, 0.1 ሚሜ EDTA, 1 ሚሜ DTT, Stabilizer, 50% ግሊሰሮል.
የክፍል ፍቺ
1µg ነጠላ-ክር ያለው ዲ ኤን ኤ በ 1 ሰዓት ውስጥ በ 37 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለማዋረድ የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን 1 አሃድ እንቅስቃሴ (U) ነው።
የጥራት ቁጥጥር
1.ኤስዲኤስ-ገጽ ከ 98% በላይ ኤሌክትሮፊዮረቲክ ንፅህና
2.የማሽቆልቆል እንቅስቃሴ, የቡድን-ወደ-ባች ቁጥጥር, መረጋጋት
3.ምንም ውጫዊ የኒውክሊየስ እንቅስቃሴ የለም፣ ምንም ውጫዊ የኢንዶኑክለስ ወይም የ exonuclease ብክለት የለም።
መመሪያዎች
አካላት | መጠን (μL) | የመጨረሻ ትኩረት |
10 × PCR ቋት (ዲኤንቲፒ ነፃ፣ Mg²+ፍርይ) | 5 | 1× |
dUTPs (dCTP፣dGTP፣dATP) | - | 200 μM |
dUTP (dTTP ተካ) | - | 200-600 μM |
25 ሚሜ ኤምጂሲኤል2 | 2-8 ማይልስ | 1-4 ሚሜ |
5 U/μL ታክ | 0.25 | 1.25 ዩ |
1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 ዩ (0.1-0.5U) |
25 × ዋና ድብልቅሀ | 2 | 1× |
አብነት | - | 1 μg / ምላሽ |
ddH₂O | ወደ 50 | - |
ማስታወሻ፡ ሀ፡ ለqPCR/qRT-PCR ጥቅም ላይ ከዋለ የፍሎረሰንት መፈተሻ ወደ ምላሽ ስርአት መጨመር አለበት።ብዙውን ጊዜ, የ 0.2 μM የመጨረሻ የፕሪመር ክምችት ጥሩ ውጤት ሊሰጥ ይችላል;የምላሽ አፈፃፀም ደካማ በሚሆንበት ጊዜ የፕሪሚየር ትኩረትን በ 0.2-1 μM ክልል ውስጥ ማስተካከል ይቻላል.ብዙውን ጊዜ, የመርማሪው ትኩረት በ 0.1-0.3 μM ውስጥ ይሻሻላል.ምርጡን የፕሪመር እና የመመርመሪያ ጥምረት ለማግኘት የማጎሪያ ቀስ በቀስ ሙከራዎች ሊደረጉ ይችላሉ።
ማስታወሻዎች
1.የ TS-UNG ኢንዛይም ጥሩ ምላሽ የሙቀት መጠን በአንጻራዊ ሁኔታ ዝቅተኛ ነው ፣ እና በ 20 ℃ ~ 37 ℃ ክልል ውስጥ ሊሻሻል ይችላል ፣ የኢንዛይም መጠን እና የምላሽ ጊዜ በ 0.1 ~ 0.5 U ፣ 5 ~ ክልል ውስጥ ሊሻሻል ይችላል ። 10 ደቂቃ;እና ኢንዛይም በግልባጭ ጽሑፍ ሂደት ውስጥ ሊነቃ ይችላል.
2.ብክለትን ለመከላከል ለ PCR እና RT-PCR ተስማሚ ነው.
3.ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ እና ለትልቅ የሙቀት መጠን መለዋወጥ አያጋልጡ.
4.የሚጨምሩት የተለያዩ ጂኖች የዲዩቲፒ አጠቃቀም ቅልጥፍና እና ለ UNG ኢንዛይም ስሜታዊነት አላቸው ፣ ስለሆነም የ UNG ስርዓት አጠቃቀም የመለየት ስሜት እንዲቀንስ ካደረገ ፣ የምላሽ ስርዓቱ መስተካከል እና ማመቻቸት አለበት ፣ የቴክኒክ ድጋፍ ከፈለጉ እባክዎን ያነጋግሩ። የእኛ ኩባንያ.