UDG/UNG ኢንዛይሞች
UDG(uracil DNA glycosylase) በ ssDNA እና dsDNA ውስጥ ባለው የስኳር-ፎስፌት የጀርባ አጥንት መካከል ያለውን የኤን-ግሊኮሲዲክ ትስስር ሃይድሮሊሲስን ሊያነቃቃ ይችላል።የኤሮሶል ብክለትን በቀላሉ መቆጣጠር የሚችል እና ለተለመደ ሞለኪውላር ባዮሎጂ እንደ PCR፣ qPCR፣ RT-qPCR እና LAMP ላሉ ስርዓቶች ተስማሚ ነው።
ዝርዝሮች
| መግለጫ አስተናጋጅ | Recombinant E.coliwith uracil DNA glycosylase gene |
| ሞለኪውላዊ ክብደት | 24. 8 ኪዳ |
| ንጽህና | ≥95% (ኤስዲኤስ-ገጽ) |
| የሙቀት ማነቃቂያ | 95℃፣ 5~10 ደቂቃ |
| የክፍል ፍቺ | አንድ አሃድ (U) በ 30 ደቂቃ ውስጥ በ 25 ℃ ውስጥ l μg dU የያዘውን ዲኤስዲኤን ሃይድሮላይዜሽን ለማነቃቃት የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን ተብሎ ይገለጻል። |
ማከማቻ
ምርቱ በ-25 ℃ ~ -15 ° ሴ ለሁለት አመታት መቀመጥ አለበት.
መመሪያዎች
1.በሚከተለው ስርዓት መሰረት የ PCR ምላሽ ቅልቅል ማዘጋጀት
| አካላት | መጠን (μL) | የመጨረሻ ትኩረት |
| 10× PCR ቋት (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 ሚሜል / ሊ |
| dUTP (10 ሚሜል / ሊ) | 3 | 0.6 ሚሜል / ሊ |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol / Leach |
| አብነት ዲ ኤን ኤ | X | - |
| ፕሪመር1 (10μሞል/ሊ) | 2 | 0.4 ማይክሮሞል / ሊ |
| ፕሪመር 2 (10μሞል/ሊ) | 2 | 0.4 ማይክሮሞል / ሊ |
| ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)፣ 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | እስከ 50 | - |
ማስታወሻ: በሙከራ መስፈርቶች መሠረት, የ dUTP የመጨረሻው ክምችት በ 0.2-0.6 mmol / L መካከል ሊስተካከል ይችላል, እና 0.2 mmol / L dTTP እየመረጡ መጨመር ይቻላል.
2.የማጉላት ሂደት
| የዑደት እርምጃ | የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደቶች |
| dU የያዘ የአብነት መበስበስ | 25℃ | 10 ደቂቃ | 1 |
| UDG ማግበር፣ አብነት የመጀመርያ denaturation | 95 ℃ | 5 ~ 10 ደቂቃዎች | 1 |
| ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 10 ሰከንድ |
30-35 |
| ማቃለል | 60℃ | 20 ሰከንድ | |
| ቅጥያ | 72℃ | 30 ሰከንድ በኪባ | |
| የመጨረሻ ቅጥያ | 72℃ | 5 ደቂቃ | 1 |
ማስታወሻ: በ 25 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ያለው የምላሽ ጊዜ በሙከራ መስፈርቶች ከ5-10 ደቂቃዎች ውስጥ ማስተካከል ይቻላል.
ማስታወሻዎች
1.UDG በአብዛኛዎቹ PCR ምላሽ ሰጪዎች ውስጥ ንቁ ነው።
2.ኢንዛይሞች ጥቅም ላይ በሚውሉበት ጊዜ በበረዶ ሳጥን ውስጥ ወይም በበረዶ መታጠቢያ ውስጥ መቀመጥ አለባቸው, እና ከተጠቀሙ በኋላ ወዲያውኑ በ-20 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ መቀመጥ አለባቸው.
3.እባኮትን ጤናዎን እና ደህንነትዎን ለማረጋገጥ አስፈላጊውን PPE ይልበሱ።
