ሞቅ ያለ ጅምር Bst 2.0 ዲኤንኤ ፖሊመሬሴ (ከግሊሰሮል ነፃ)

Bst DNA polymerase V2 ከ Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I የተገኘ ነው፣ እሱም 5′→3′ የዲኤንኤ ፖሊሜሬሴ እንቅስቃሴ እና ጠንካራ የሰንሰለት መተኪያ እንቅስቃሴ ያለው፣ነገር ግን 5′→3′ exonuclease እንቅስቃሴ የለውም።Bst DNA Polymerase V2 ለስትራንድ ማፈናቀል፣ ለአይኦተርማል ማጉላት LAMP (Loop mediated isothermal amplification) እና ለፈጣን ቅደም ተከተል ተስማሚ ነው።Bst DNA polymerase V2 በ Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) ላይ የተመሰረተ ሞቅ ያለ ጅምር ስሪት ነው በተገላቢጦሽ ማሻሻያ ቴክኖሎጂ የተገኘ፣ ይህም የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ እንቅስቃሴን በክፍል ሙቀት ሊገታ ስለሚችል ምላሽ ሰጪ ስርዓቱ እንዳይሰራ በክፍል ሙቀት ሊሰራ እና ሊዘጋጅ ይችላል። - የተወሰነ ማጉላት እና የምላሽ ቅልጥፍናን ማሻሻል ፣ እና ይህ እትም በሊፊሊዝድ ሊደረግ ይችላል።በተጨማሪም, እንቅስቃሴው በከፍተኛ ሙቀት ውስጥ ይለቀቃል, ስለዚህ የተለየ የማግበር ደረጃ አያስፈልግም.

አካላት

Bst DNA polymerase V2 (ከግላይሰሮል ነፃ የሆነ)(8U/μL)

መተግበሪያዎች

1.LAMP isothermal ማጉላት

2.የዲኤንኤ ገመድ ነጠላ የመፈናቀል ምላሽ

3.ከፍተኛ የጂሲ ጂን ቅደም ተከተል

4.የናኖግራም ደረጃ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል።

የማከማቻ ሁኔታ

ከ 0 ዲግሪ ሴንቲግሬድ በታች መጓጓዣ እና በ -25 ° ሴ ~ -15 ° ሴ ውስጥ ይቀመጣል.

የክፍል ፍቺ

አንድ ክፍል በ 30 ደቂቃ ውስጥ በ 65 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ 25 nmol dNTP በአሲድ የማይሟሟ ቁስ ውስጥ የሚያካትት የኢንዛይም መጠን ይገለጻል።

የጥራት ቁጥጥር

1.የፕሮቲን ንፅህና ጥናት (SDS-ገጽ):የBst DNA polymerase V2 ንፅህና ≥99% የሚወሰነው በSDS-PAGE ትንተና Coomassie Blue ማወቂያን በመጠቀም ነው።

2.Endonucleaseእንቅስቃሴ:ቢያንስ 8 ዩ ቢኤስት ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ V2 ከ1 μg λDNA ጋር ለ16 ሰአታት በ37 ℃ የ 50 μL ምላሽ መፈልሰፍ እንደ ተወሰነው የመበስበስ ሂደት አያስከትልም።

3.የ Exonuclease እንቅስቃሴ:ቢያንስ 8 ዩ ቢኤስት ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ V2 በ1 μg λ -Hind Ⅲ ዲጄስት ዲኤንኤን ለ16 ሰአታት በ37 ℃ የያዘ የ50 μL ምላሽ እንደተወሰነው ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አያስከትልም።

4.የኒኬሴስ እንቅስቃሴ:ቢያንስ 8 ዩ ቢኤስት ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ V2 ከ1 μg pBR322 ዲኤንኤ ጋር ለ16 ሰአታት በ37°C የያዘ የ50 μL ምላሽ እንደተወሰነው ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አያስከትልም።

5.RNase እንቅስቃሴ:ቢያንስ 8 ዩ ቢኤስት ዲኤንኤ polymerase V2 ከ1.6 μg MS2 አር ኤን ኤ ጋር ለ16 ሰአታት በ37°C የያዘ የ50 μL ምላሽ እንደተወሰነው ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አያስከትልም።

6.ኮላይዲ ኤን ኤ፡120 ዩ Bst DNA polymerase V2 ለኢ.ኮሊ ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ በ TaqMan qPCR በመጠቀም ለኢ.ኮሊ 16S አር ኤን ኤ ሎከስ ልዩ ፕሪመርሮች ይጣራሉ።የኢ.ኮሊ ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ መበከል ≤1 ቅጂ ነው።

LAMP ምላሽ

ማስታወሻዎች፡-

1) ሀ.SYTOTM 16 አረንጓዴ (25×): በሙከራ ፍላጎቶች መሰረት, ሌሎች ቀለሞችን እንደ ምትክ መጠቀም ይቻላል;

2) ለ.ዋና ድብልቅ፡ 20 µ ኤም FIP፣ 20 μM BIP፣ 2.5 µ M F3፣ 2.5 µ M B3፣ 5 µ M LF፣ 5 μM LB እና ሌሎች ጥራዞችን በማቀላቀል የተገኘ።

ምላሽ እና ሁኔታ

1 × HC Bst V2 Buffer፣ የማቀፊያው ሙቀት በ60°ሴ እና በ65°ሴ መካከል ነው።

የሙቀት ማነቃቂያ

 80 ° ሴ, 20 ደቂቃዎች