ፕሮቲን ኬ (ፈሳሽ)
የድመት ቁጥር፡ HC4502A
ፕሮቲኔዝ ኬ ሰፊ የንዑስ ክፍል ልዩነት ያለው የተረጋጋ ሴሪን ፕሮቲን ነው።በንጽህና ማጽጃዎች ውስጥ እንኳን ብዙ ፕሮቲኖችን በአገሬው ግዛት ውስጥ ይቀንሳል.ከክሪስታል እና ሞለኪውላዊ መዋቅር ጥናቶች የተገኘው መረጃ እንደሚያመለክተው ኢንዛይሙ የሱብሊሲን ቤተሰብ የሆነ ንቁ የሳይት ካታሊቲክ ትሪያድ (Asp) ነው።39- የእሱ69- ሰር224).ዋነኛው የዝርፊያ ቦታ ከካርቦክሳይል ቡድን የአልፋቲክ እና ጥሩ መዓዛ ያላቸው አሚኖ አሲዶች የታገዱ የአልፋ አሚኖ ቡድኖች ጋር ያለው የፔፕታይድ ቦንድ ነው።እሱ በተለምዶ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላልልዩነት.
ዝርዝር መግለጫ
| መልክ | ከቀለም እስከ ቀላል ቡናማ ፈሳሽ |
| እንቅስቃሴ | ≥800 U/ml |
| የፕሮቲን ትኩረት | ≥20 mg/ml |
| ዲናሴ | ምንም አልተገኘም። |
| RNase | ምንም አልተገኘም። |
የማከማቻ ሁኔታዎች
በ2-8 ℃ የሙቀት መጠን ያከማቹ።
ንብረቶች
| EC ቁጥር | 3.4.21.64 (አርecombinant ከTritirachium አልበም) |
| ሞለኪውላዊ ክብደት | 29 ኪዳ (ኤስዲኤስ-ገጽ) |
| አይዞኤሌክትሪክ ነጥብ | 7.81 |
| ምርጥ ፒኤች | 7.0-12.0 ምስል 1 |
| ምርጥ ሙቀት | 65 ℃ ምስል 2 |
| የፒኤች መረጋጋት | ፒኤች 4.5-12.5 (25 ℃, 16 ሰ) ምስል 3 |
| የሙቀት መረጋጋት | ከ50℃ በታች (pH 8.0፣ 30 mins) ምስል.4 |
| አንቀሳቃሾች | SDS, ዩሪያ |
| ማገጃዎች | Diisopropyl fluorophosphate;phenylmethylsulfonyl ፍሎራይድ |
መተግበሪያዎች
1. የጄኔቲክ መመርመሪያ ኪት
2. አር ኤን ኤ እና ዲ ኤን ኤ የማስወጫ ዕቃዎች
3. ፕሮቲን ያልሆኑ ንጥረ ነገሮችን ከቲሹዎች ማውጣት, የፕሮቲን ቆሻሻዎች መበላሸት, ለምሳሌ የዲኤንኤ ክትባቶች እና የሄፓሪን ማዘጋጀት.
4. በ pulsed electrophoresis የክሮሞሶም ዲ ኤን ኤ ማዘጋጀት
5. ምዕራባዊ ነጠብጣብ
6. ኢንዛይም glycosylated albumin reagents በብልቃጥ ውስጥ ምርመራ
ቅድመ ጥንቃቄዎች
ሲጠቀሙ ወይም ሲመዘኑ የመከላከያ ጓንቶችን እና መነጽሮችን ይልበሱ እና ከተጠቀሙ በኋላ በደንብ አየር እንዲዘጉ ያድርጉ።ይህ ምርት የቆዳ አለርጂዎችን እና ከባድ የአይን ብስጭት ሊያስከትል ይችላል.ከተነፈሰ አለርጂ ወይም አስም ምልክቶች ወይም የመተንፈስ ችግር ሊያስከትል ይችላል።የመተንፈስ ችግር ሊያስከትል ይችላል.
አስይ
የክፍል ትርጉም
አንድ አሃድ (U) በሚከተሉት ሁኔታዎች በደቂቃ 1 ማይክሮሞል ታይሮሲን ለማምረት ኬዝይንን ሃይድሮላይዝ ለማድረግ የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን ይገለጻል።
Reagents ዝግጅት
ሬጀንት I፡ 1ጂ ወተት ኬሲን በ50ሚሊ የ 0.1M የሶዲየም ፎስፌት መፍትሄ (pH 8.0) ውስጥ ተፈጭቷል፣ በ65-70 ℃ ውሃ ውስጥ ለ15mins ተክሏል፣ ተቀላቅሎ እና ሟሟ፣ በውሃ የቀዘቀዘ፣ በሶዲየም ሃይድሮክሳይድ ወደ pH8.0 የተስተካከለ እና ተስተካክሏል። መጠን 100ml.
Reagent II፡ የቲሲኤ መፍትሄ፡0.1M trichloroacetic acid፣ 0.2M sodium acetate፣ 0.3M አሴቲክ አሲድ።
Reagent III: 0.4M ና2CO3መፍትሄ.
ሬጀንት IV፡ ፎሪንት ሬጀንት በንጹህ ውሃ ለ 5 ጊዜ ተበረዘ።
Reagent V፡ ኢንዛይም ማሟያ፡ 0.1M የሶዲየም ፎስፌት መፍትሄ (pH 8.0)።
Reagent VI: የታይሮሲን መፍትሄ: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml ታይሮሲን በ 0.2M HCl ይሟሟል.
አሰራር
1. 0.5ml reagent I በቅድመ-ሙቅ እስከ 37℃፣ 0.5ml የኢንዛይም መፍትሄ ጨምረው በደንብ ይደባለቁ እና በ 37℃ ለ 10mins ይቅቡት።
2. ምላሹን ለማቆም 1ml reagent II ይጨምሩ፣ በደንብ ይደባለቁ እና ለ 30 ደቂቃዎች መፈልፈሉን ይቀጥሉ።
3. የሴንትሪፉጌት ምላሽ መፍትሄ.
4. 0.5ml supernatant ውሰድ፣ 2.5ml reagent III፣ 0.5ml reagent IV ጨምር፣ በደንብ ተቀላቅሎ በ37℃ ለ30mins ጨምር።
5. ኦ.ዲ660እንደ OD ተወስኗል1;ባዶ መቆጣጠሪያ ቡድን፡ 0.5ml reagent V OD ለመወሰን የኢንዛይም መፍትሄን ለመተካት ይጠቅማል660እንደ ኦ.ዲ2, ΔOD=OD1- ኦዲ2.
6. ኤል-ታይሮሲን መደበኛ ከርቭ፡ 0.5mL የተለያየ ትኩረት ኤል-ታይሮሲን መፍትሄ፣ 2.5mL Reagent III፣ 0.5mL Reagent IV በ 5ml centrifuge tube፣ በ37℃ ውስጥ ለ30mins መክተት፣ ለኦዲ ማግኘቱ660ለተለያዩ የኤል-ታይሮሲን ትኩረት፣ ከዚያም መደበኛውን ጥምዝ Y=kX+b አገኘ፣ Y የ L-tyrosine ትኩረት፣ X OD ነው።600.
ስሌት
2፡ አጠቃላይ የምላሽ መፍትሄ (ሚሊ) መጠን
0.5: የኢንዛይም መፍትሄ (ሚሊ) መጠን
0.5: ምላሽ ፈሳሽ መጠን በ chromogenic ቆራጥነት (ሚሊ)
10፡ የምላሽ ጊዜ (ደቂቃ)
Df: ማቅለጫ ብዜት
Cየኢንዛይም ትኩረት (mg/ml)
ዋቢዎች
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23፡77።
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.ባዮፊስ.ሬስ.ኮምዩን።(1971);44፡513።
3. ሒልዝ፣ ኤች.ወ ዘ ተ.,ኢሮ.ጄ ባዮኬም.(1975);56፡103–108።
4. ሳምብሩክ ጄet አል. ሞለኪውላር ክሎኒንግ፡ የላብራቶሪ መመሪያ፣ 2ኛ እትም፣ ቀዝቃዛ ስፕሪንግ ሃርቦር ላብራቶሪ ፕሬስ፣ ቀዝቃዛ ስፕሪንግ ሃርበር(1989)።
አሃዞች
ምስል. 1 ምርጥ pH
100 ሚሜ ቋት መፍትሄ: pH6.0-8.0, ና-ፎስፌት;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5፣ Glycine-NaOH.የኢንዛይም ትኩረት፡1mg/ml
ምስል 2 ምርጥ temperatur
ምላሽ በ20ሚሜ ኬ-ፎስፌት ቋት pH 8.0።የኢንዛይም ትኩረት: 1 mg / ml
ምስል 3 ፒኤች መረጋጋት
25℃፣16 h-ህክምና ከ50ሚሜ ቋት መፍትሄ ጋር፡ pH 4.5-5.5፣ Acetate;ፒኤች 6.0-8.0, ና-ፎስፌት;ፒኤች 8.0-9.0፣ ትሪስ-ኤች.ሲ.ኤል.ፒኤች 9.0-12.5, ግሊሲን-ናኦኤች.የኢንዛይም ትኩረት: 1 mg / ml
ምስል 4 የሙቀት መረጋጋት
የ30 ደቂቃ ሕክምና ከ50mM Tris-HCl ቋት፣ pH 8.0 ጋር።የኢንዛይም ትኩረት: 1 mg / ml
ምስል 5 ማከማቻ መረጋጋትty at 25℃
