የዱር ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ
ታክ ዲኤንኤ ፖሊመሬሴ ከቴርሙስ አኳቲከስ YT-1 ቴርሞስታብል ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ነው፣ እሱም 5′→3′ ፖሊሜሬሴ እንቅስቃሴ እና የ 5′ ፍላፕ ኢንዶኑክሊዝ እንቅስቃሴ አለው።
አካላት
| አካል | HC1010 ኤ-01 | HC1010 ኤ-02 | HC1010 ኤ-03 | HC1010 ኤ-04 |
| 10× Taq Buffer | 2 × 1 ሚሊ | 2 × 10 ሚሊ | 2 × 50 ሚሊ | 5 × 200 ሚሊ |
| ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ (5 U/μL) | 0.1 ሚሊ | 1 ሚሊ | 5 ሚሊ | 5 × 10 ሚሊ |
የማከማቻ ሁኔታ
ከ 0 ዲግሪ ሴንቲግሬድ በታች መጓጓዣ እና በ -25 ° ሴ ~ -15 ° ሴ ውስጥ ይቀመጣል.
የክፍል ፍቺ
አንድ ክፍል በ 30 ደቂቃ ውስጥ በ 75 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ 15 nmol dNTP በአሲድ የማይሟሟ ቁስ ውስጥ የሚያካትት የኢንዛይም መጠን ይገለጻል።
የጥራት ቁጥጥር
1.የፕሮቲን ንፅህና ጥናት (SDS-ገጽ):የTaq DNA polymerase ንፅህና ≥95% በSDS-PAGE ትንተና ተወስኗል።
2.Endonuclease እንቅስቃሴ:ቢያንስ 5 ዩ የ Taq DNA polymerase ከ1 μg λDNA ጋር ለ16 ሰአታት በ37 ℃ ላይ እንደተወሰነው ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አያስከትልም።
3.የ Exonuclease እንቅስቃሴ:ቢያንስ 5 ዩ የ Taq DNA polymerase ከ 1 μg λ -Hind Ⅲ ዲ ኤን ኤ ለ16 ሰአታት በ 37 ℃ መፍጨት እንደ ተወሰነው የመበስበስ ችግር አያስከትልም።
4.የኒኬሴስ እንቅስቃሴ:ቢያንስ 5 ዩ የ Taq DNA polymerase ከ 1 μg pBR322 ዲ ኤን ኤ ጋር ለ 16 ሰአታት በ 37 ° ሴ በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ እንደተወሰነው ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አያስከትልም.
5.RNase እንቅስቃሴ:ቢያንስ 5 ዩ የ Taq DNA polymerase ከ1.6 μg MS2 አር ኤን ኤ ጋር ለ16 ሰአታት በ37°C በ 37° ሴ እንደተወሰነው ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አያስከትልም።
6.ኮላይዲ ኤን ኤ፡5 U of Taq DNA polymerase ለኢ.ኮሊ ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ በ TaqMan qPCR በመጠቀም ለኢ.ኮሊ 16S አር ኤን ኤ ሎከስ ልዩ ፕሪመርሮች ይጣራሉ።የኢ.ኮሊ ጂኖሚክ ዲ ኤን ኤ መበከል ≤1 ቅጂ ነው።
7.PCR ማጉላት (5.0 ኪባ ላምዳ ዲ ኤን ኤ)- 5 ng Lambda DNA የያዘ 50µL ምላሽ ከ 5 ዩኒት Taq DNA Polymerase ለ 25 ዑደቶች PCR ማጉላት የሚጠበቀው 5.0 ኪባ ምርት።
ምላሽ ማዋቀር
| አካላት | ድምጽ |
| አብነት ዲ ኤን ኤa | አማራጭ |
| 10 μM ወደፊት ፕሪመር | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP ድብልቅ (እያንዳንዱ 10 ሚሜ) | 1 μL |
| 10× Taq Buffer | 5 μኤል |
| ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴለ | 0.25 ማይልስ |
| ከኑክሌር-ነጻ ውሃ | እስከ 50 μL |
ማስታወሻዎች፡-
1) የተለያዩ አብነቶች ጥሩ ምላሽ ትኩረት የተለየ ነው።የሚከተለው ሠንጠረዥ የሚመከር የ50µL ምላሽ ሥርዓት አጠቃቀምን ያሳያል።
| ዲ.ኤን.ኤ | መጠን |
| ጂኖሚክ | 1 ng-1 μግ |
| ፕላዝማ ወይም ቫይራል | 1 ገጽ-1 ንግ |
2) እጅግ በጣም ጥሩው የTaq DNA Polymerase ትኩረት በልዩ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ከ 0.25 µL ~ 1 µL ሊደርስ ይችላል።
ምላሽፕሮግራም
| ደረጃ | የሙቀት መጠን(° ሴ) | ጊዜ | ዑደቶች |
| የመነሻ መነጠልa | 95 ℃ | 5 ደቂቃ | - |
| ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 15-30 ሳ | 30-35 ዑደቶች |
| ማቃለልለ | 60 ℃ | 15 ሰ | |
| ቅጥያ | 72 ℃ | 1 ኪባ/ደቂቃ | |
| የመጨረሻ ቅጥያ | 72 ℃ | 5 ደቂቃ | - |
ማስታወሻዎች፡-
1) የመነሻው የመነሻ ሁኔታ ለአብዛኛዎቹ የማጉላት ምላሾች ተስማሚ ነው እና እንደ አብነት መዋቅር ውስብስብነት ሊቀየር ይችላል።የአብነት አወቃቀሩ ውስብስብ ከሆነ፣የመጀመሪያውን የዲኔቱሽን ውጤት ለማሻሻል የቅድመ-ዲኒዩሽን ጊዜ ወደ 5-10 ደቂቃ ሊራዘም ይችላል።
2) የማስታወሻውን የሙቀት መጠን በፕሪመር (Tm) ዋጋ መሰረት ማስተካከል ያስፈልጋል, ይህም በአጠቃላይ ከ 3 ~ 5 ℃ ዝቅተኛ የፕሪመር ዋጋ;ለተወሳሰቡ አብነቶች ፣ ቀልጣፋ ማጉላትን ለማግኘት የማራዘሚያ ሙቀትን ማስተካከል እና የማራዘም ጊዜን ማራዘም ያስፈልጋል።
