ሁለንተናዊ SYBR አረንጓዴ qPCR ፕሪሚክስ (ሰማያዊ)
የድመት ቁጥር፡ HCB5041B
ሁለንተናዊ ብሉ qPCR Master Mix (ዳይ ቤዝድ) ለ2× የእውነተኛ ጊዜ መጠናዊ PCR ማጉላት በከፍተኛ ትብነት እና ልዩነት የሚታወቅ፣ ሰማያዊ ቀለም ያለው እና የናሙና የመደመርን የመከታተል ውጤት ያለው ቅድመ መፍትሄ ነው።ዋናው ክፍል Taq DNA polymerase የናሙና ዝግጅት በሚደረግበት ጊዜ በፕሪመር ማደንዘዣ ምክንያት ልዩ ያልሆነ ማጉላትን በተሳካ ሁኔታ ለመግታት የፀረ-ሰው ሙቅ ጅምርን ይጠቀማል።በተመሳሳይ ጊዜ ፣ ቀመሩ የ PCR ምላሽን የማጉላት ብቃትን ለማሻሻል እና የጂኖችን ማጉላት ከተለያዩ የጂሲ ይዘቶች (30 ~ 70%) ጋር ለማመጣጠን አስተዋዋቂ ምክንያቶችን ይጨምራል ፣ ስለሆነም መጠናዊ PCR በሰፊ መጠናዊ ጥሩ የመስመር ግንኙነት ማግኘት ይችላል። ክልል.ይህ ምርት በአብዛኛዎቹ qPCR መሳሪያዎች ላይ የሚተገበር ልዩ የ ROX Passive Reference Dye ይዟል።በተለያዩ መሳሪያዎች ላይ የ ROX ትኩረትን ማስተካከል አስፈላጊ አይደለም.የምላሽ ስርዓቱን ለማጉላት ለማዘጋጀት ፕሪሚኖችን እና አብነቶችን ማከል ብቻ አስፈላጊ ነው.
አካላት
ሁለንተናዊ ሰማያዊ qPCR ማስተር ድብልቅ
የማከማቻ ሁኔታዎች
ምርቱ በበረዶ ማሸጊያዎች ተጭኖ በ -25℃~-15℃ ለ18 ወራት ሊከማች ይችላል።የምላሽ ስርዓቱን በማከማቸት ወይም በሚዘጋጅበት ጊዜ ኃይለኛ የብርሃን ጨረር ማስወገድ ያስፈልጋል.
ዝርዝር መግለጫ
ትኩረት መስጠት | 2× |
የማወቂያ ዘዴ | SYBR |
PCR ዘዴ | qPCR |
ፖሊሜሬዝ | ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ |
የናሙና ዓይነት | ዲ.ኤን.ኤ |
የመተግበሪያ መሳሪያዎች | አብዛኛዎቹ የqPCR መሳሪያዎች |
የምርት አይነት | የSYBR ፕሪሚክስ ለእውነተኛ ጊዜ የፍሎረሰንት መጠናዊ PCR |
ለ (ማመልከቻ) ያመልክቱ | የጂን አገላለጽ |
መመሪያዎች
1.Reaction ስርዓት
አካላት | ቮልሜ (μL) | ቮልሜ (μL) | የመጨረሻ ትኩረት |
ሁለንተናዊ SYBR አረንጓዴ qPCR ፕሪሚክስ | 25 | 10 | 1× |
ወደፊት ፕሪመር (10μሞል/ሊ) | 1 | 0.4 | 0.2μሞል/ሊ |
ተገላቢጦሽ ፕሪመር (10μሞል/ሊ) | 1 | 0.4 | 0.2μሞል/ሊ |
ዲ.ኤን.ኤ | X | X | |
ddH2O | እስከ 50 | እስከ 20 ድረስ | - |
[ማስታወሻ]: ከመጠን በላይ አረፋዎችን በጠንካራ መንቀጥቀጥ ለማስወገድ ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ ይቀላቅሉ።
ሀ) የፕሪመር ማጎሪያ፡ የመጨረሻው የፕሪመር ክምችት 0.2μmol/L ነው፣ እና እንደአስፈላጊነቱ በ0.1 እና 1.0μmol/L መካከል ሊስተካከል ይችላል።
ለ) የአብነት ትኩረት፡ አብነት ያልተሟጠጠ የሲዲኤንኤ ክምችት መፍትሄ ከሆነ፣ ጥቅም ላይ የሚውለው መጠን ከጠቅላላው የqPCR ምላሽ መጠን ከ1/10 መብለጥ የለበትም።
ሐ) የአብነት ማሟያ፡- የሲዲኤንኤ ስቶክ መፍትሄን በ5-10 ጊዜ ለማቅለል ይመከራል።በማጉላት የተገኘው የሲቲ እሴት ከ20-30 ዑደቶች ሲሆን የተጨመረው ምርጥ አብነት መጠን የተሻለ ነው።
መ) የአጸፋ ምላሽ ዘዴ፡- የጂን ማጉላትን ውጤታማነት እና ተደጋጋሚነት ለማረጋገጥ 20μL ወይም 50μL እንዲጠቀሙ ይመከራል።
ሠ) የሥርዓት ዝግጅት፡ እባክዎን እጅግ በጣም ንጹህ በሆነው አግዳሚ ወንበር ላይ ይዘጋጁ እና ምክሮችን እና የምላሽ ቱቦዎችን ያለ ኑክሊየስ ቀሪዎች ይጠቀሙ።ጠቃሚ ምክሮችን በማጣሪያ ማሸጊያዎች እንዲጠቀሙ ይመከራል.የብክለት እና የኤሮሶል ብክለትን ያስወግዱ.
2.ምላሽ ፕሮግራም
መደበኛ ፕሮግራም
የዑደት እርምጃ | የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደቶች |
የመነሻ መነጠል | 95 ℃ | 2 ደቂቃ | 1 |
ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 10 ሰከንድ | 40 |
ማሰር/ማራዘሚያ | 60℃ | 30 ሰከንድ★ | |
የማቅለጥ ኩርባ ደረጃ | የመሣሪያ ነባሪዎች | 1 |
ፈጣን ፕሮግራም
የዑደት እርምጃ | የሙቀት መጠን | ጊዜ | ዑደቶች |
የመነሻ መነጠል | 95 ℃ | 30 ሰከንድ | 1 |
ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 3 ሰከንድ | 40 |
ማሰር/ማራዘሚያ | 60℃ | 20 ሰከንድ★ | |
የማቅለጥ ኩርባ ደረጃ | የመሣሪያ ነባሪዎች | 1 |
[ማስታወሻ]: ፈጣን ፕሮግራሙ ለብዙዎቹ ጂኖች ተስማሚ ነው, እና መደበኛ ፕሮግራሞች ለግለሰብ ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ጂኖች መሞከር ይቻላል.
ሀ) የሚያበሳጭ የሙቀት መጠን እና ጊዜ፡- እባክዎን እንደ ፕሪመር እና ዒላማው ጂን ርዝመት ያስተካክሉ።
ለ) የፍሎረሰንት ሲግናል ማግኛ (★): እባክዎን የሙከራ ሂደቱን በመሳሪያው አጠቃቀም መመሪያ ውስጥ ባሉት መስፈርቶች መሰረት ያዘጋጁ።
ሐ) መቅለጥ ኩርባ፡- የመሳሪያ ነባሪ ፕሮግራም በመደበኛነት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።
3. የውጤት ትንተና
ለቁጥራዊ ሙከራዎች ቢያንስ ሦስት ባዮሎጂያዊ ቅጂዎች ያስፈልጋሉ።ከምላሹ በኋላ, የማጉላት ኩርባ እና ማቅለጥ መረጋገጥ ያስፈልጋል.
3.1 የማጉላት ኩርባ፡-
መደበኛ የማጉላት ኩርባ S-ቅርጽ ያለው ነው።የቁጥር ትንተና በጣም ትክክለኛ የሚሆነው የሲቲ እሴቱ በ20 እና 30 መካከል ሲወድቅ ነው።የሲቲ እሴት ከ10 በታች ከሆነ አብነቱን ማቅለጥ እና ፈተናውን እንደገና ማካሄድ ያስፈልጋል።የሲቲ እሴቱ በ30-35 መካከል ሲሆን የአብነት ትኩረትን ወይም የምላሽ ስርዓቱን መጠን መጨመር አስፈላጊ ሲሆን ይህም የማጉላት ቅልጥፍናን ለማሻሻል እና የውጤት ትንተና ትክክለኛነት ለማረጋገጥ ነው.የሲቲ እሴቱ ከ 35 በላይ ሲሆን የፈተና ውጤቶቹ የጂንን አገላለጽ በመጠን ሊተነተኑ አይችሉም ነገር ግን ለጥራት ትንተና ሊያገለግል ይችላል።
3.2 የማቅለጥ ኩርባ፡
የ መቅለጥ ጥምዝ ነጠላ ጫፍ ምላሽ Specificity ጥሩ ነው እና መጠናዊ ትንተና ሊከናወን እንደሚችል ያመለክታል;የማቅለጫው ኩርባ ድርብ ወይም ብዙ ጫፎችን ካሳየ የቁጥር ትንተና ሊደረግ አይችልም።የማቅለጫው ኩርባ ድርብ ጫፎችን ያሳያል፣ እና ኢላማ ያልሆነው ጫፍ ፕሪመር ዲመር ወይም ልዩ ያልሆነ ማጉላት በዲ ኤን ኤ አጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ መሆኑን መወሰን ያስፈልጋል።የፕሪመር ዳይመር ከሆነ, የፕሪሚየር ትኩረትን ለመቀነስ ወይም ከፍተኛ የማጉላት ቅልጥፍናን እንደገና ለማዘጋጀት ይመከራል.ልዩ ያልሆነ ማጉላት ከሆነ፣ እባክዎን የሚያስጨንቀውን የሙቀት መጠን ይጨምሩ ወይም ፕሪሚኖችን በልዩነት እንደገና ይንደፉ።
ማስታወሻዎች
ጤናዎን እና ደህንነትዎን ለማረጋገጥ እባክዎን አስፈላጊውን PPE ይልበሱ ፣ እንደዚህ ያሉ የላብራቶሪ ኮት እና ጓንቶች!
ይህ ምርት ለምርምር ብቻ ጥቅም ላይ ይውላል!