Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG ወይም UDG) የሞለኪውላዊ ክብደት 25 ኪ.ዲ.ኤ.ነፃ ዩራሲልን ከዩራሲል ከያዘ ነጠላ-ክር እና ባለ ሁለት ገመድ ዲ ኤን ኤ እንዲለቀቅ ያበረታታል፣ እና በአር ኤን ኤ ላይ ምንም እንቅስቃሴ የለውም፣ እና የ PCR ማጉያ ምርቶችን እንዳይበከል ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።የድርጊት መርሆው የተመሰረተው በፒሲአር ምላሽ ውስጥ dUTP በዲቲቲፒ ከተተካ እና dU መሠረቶችን የያዘ የ PCR ማጉላት ምርት ከተፈጠረ ኢንዛይሙ የ U ቤዝ ግላይኮሲዲክ ቦንድ በነጠላ ክር እና በድርብ-ክር ሊፈርስ ይችላል በሚለው እውነታ ላይ ነው. ዲ ኤን ኤ እና የ PCR ማጉላት ምርትን ዝቅ ማድረግ።
የሚመከር መተግበሪያ
የብክለት መከላከያ ማጉላት
የማከማቻ ሁኔታ
-20 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ለረጅም ጊዜ ማከማቻነት, ከመጠቀምዎ በፊት በደንብ መቀላቀል አለበት, ብዙ ጊዜ ቅዝቃዜን ያስወግዱ.
የማከማቻ ቋት
20 ሚሜ Tris-HCl (pH 8.0) ፣ 150 ሚሜ NaCl ፣ 1 ሚሜ EDTA ፣ 1 ሚሜ DTT ፣ ማረጋጊያ ፣ 50% ግሊሰሮል ።
የክፍል ፍቺ
በ1 ሰአት ውስጥ በ37°ሴ 1µg ባለ ነጠላ-ክር ያለው ዲኤንኤ ለማዋረድ የሚያስፈልገው የኢንዛይም መጠን 1 አሃድ ነው።
የጥራት ቁጥጥር
1.ኤስዲኤስ-ገጽ ከ 98% በላይ ኤሌክትሮፊዮረቲክ ንፅህና
2.የማጉላት ትብነት፣ ባች-ወደ-ባች ቁጥጥር፣ መረጋጋት
3.1U of UNG በ50℃ ለ2ደቂቃ ከታከመ በኋላ ዩ ከ103 ቅጂዎች በታች ያለው አብነት ሙሉ ለሙሉ መበላሸት አለበት እና ምንም የማጉያ ምርት ሊሰራ አይችልም
4.ምንም ውጫዊ የኒውክሊየስ እንቅስቃሴ የለም
መመሪያዎች
| አካላት | መጠን (μL) | የመጨረሻ ትኩረት |
| 10 × PCR ቋት (ዲኤንቲፒ ነፃ፣ Mg²+ፍርይ) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP፣dGTP፣dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP ተካ) | - | 200-600 μM |
| 25 ሚሜ ኤምጂሲኤል2 | 2-8 ማይልስ | 1-4 ሚሜ |
| 5 U/μL ታክ | 0.25 | 1.25 ዩ |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 ዩ (0.1-0.5) |
| 25 × ዋና ድብልቅሀ | 2 | 1× |
| አብነት | - | 1 μg / ምላሽ |
| ddH₂O | ወደ 50 | - |
ማስታወሻ: መ: ለqPCR/qRT-PCR ጥቅም ላይ ከዋለ የፍሎረሰንት መፈተሻ ወደ ምላሽ ስርዓት መጨመር አለበት።ብዙውን ጊዜ, የ 0.2 μM የመጨረሻ የፕሪመር ክምችት ጥሩ ውጤት ሊሰጥ ይችላል;የምላሽ አፈፃፀም ደካማ በሚሆንበት ጊዜ የፕሪሚየር ትኩረትን በ 0.2-1 μM ክልል ውስጥ ማስተካከል ይቻላል.ብዙውን ጊዜ, የመርማሪው ትኩረት በ 0.1-0.3 μM ውስጥ ይሻሻላል.ምርጡን የፕሪመር እና የመመርመሪያ ጥምረት ለማግኘት የማጎሪያ ቀስ በቀስ ሙከራዎች ሊደረጉ ይችላሉ።
ማስታወሻዎች
1.UNG ኢንዛይም የተበከሉትን dUTP ማጉላት ምርቶች ከ PCR ማጉላት ምላሽ በፊት ከምላሽ ስርዓቱ ለማስወገድ እና በምርት ብክለት ምክንያት የውሸት አወንታዊ ውጤቶችን ለማስወገድ ሊያገለግል ይችላል።
2.ለ UNG ኢንዛይም በፀረ-ብክለት PCR ምላሽ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውለው በጣም ጥሩው የሙቀት መጠን በአጠቃላይ 50 ℃ ለ 2 ደቂቃዎች ነው።የማነቃቂያው ሁኔታ 95 ℃ ለ 5 ደቂቃዎች ነው።
3.ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን ያስወግዱ እና ለትልቅ የሙቀት መጠን መለዋወጥ አያጋልጡ.
4.የሚጨምሩት የተለያዩ ጂኖች የዲዩቲፒ አጠቃቀም ቅልጥፍና እና ለ UNG ኢንዛይም ስሜታዊነት አላቸው ፣ ስለሆነም የ UNG ስርዓት አጠቃቀም የመለየት ስሜት እንዲቀንስ ካደረገ ፣ የምላሽ ስርዓቱ መስተካከል እና ማመቻቸት አለበት ፣ የቴክኒክ ድጋፍ ከፈለጉ እባክዎን ያነጋግሩ። የእኛ ኩባንያ.
