Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (አንቲቦዲ ማሻሻያ) 5′→3′ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴ እና የ5′ ፍላፕ ኤንዶኑክሊዝ እንቅስቃሴ ያለው ከቴርሙስ አኳቲከስ YT-1 የመጣ ትኩስ ጅምር ቴርሞስታብል ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ ነው።ትኩስ ጅምር Taq DNA polymerase በቴርሞላባይል ታክ ፀረ እንግዳ አካላት የተቀየረ የታክ ዲኤንኤ ፖሊመሬሴ ነው።ፀረ-ሰው ማሻሻያ የ PCR ልዩነት፣ ስሜታዊነት እና ምርት ጨምሯል።
አካላት
| አካል | HC1012 አ-01 | HC1012 አ-02 | HC1012 አ-03 | HC1012 አ-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4 × 1 ሚሊ | 4 × 10 ሚሊ | 4 × 50 ሚሊ | 5 × 400 ሚሊ |
| ትኩስ ጅምር Taq ዲኤንኤ ፖሊመሬሴ (ፀረ-ሰው የተቀየረ) (5 U/μL) | 0.1 ሚሊ | 1 ሚሊ | 5 ሚሊ | 10 × 5 ሚሊ |
መተግበሪያዎች
10 ሚሜ Tris-HCl (pH 7.4 በ 25 ℃)፣ 100 ሚሜ ኬሲል፣ 0.1 ሚሜ EDTA፣ 1 ሚሜ ዲቲዮትሬቶል፣ 0.5% Tween20፣ 0.5% IGEPALCA-630 እና 50% Glycerol።
የማከማቻ ሁኔታ
ከ 0 ዲግሪ ሴንቲግሬድ በታች መጓጓዣ እና በ -25 ° ሴ ~ -15 ° ሴ ውስጥ ይቀመጣል.
የክፍል ፍቺ
አንድ ክፍል በ 30 ደቂቃ ውስጥ በ 75 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ 15 nmol dNTP በአሲድ የማይሟሟ ቁስ ውስጥ የሚያካትት የኢንዛይም መጠን ይገለጻል።
የጥራት ቁጥጥር
1.Endonuclease እንቅስቃሴ:20 ዩ ኢንዛይም በ 4 μg pUC19 ዲ ኤን ኤ ለ 4 ሰአታት በ 37 ℃ መፈልፈሉ በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንደተወሰነው የዲኤንኤ መበላሸት አያስከትልም።
2.5 ኪባ ላምዳ PCR፡25 የፒሲአር ዑደቶች የ5ng Lambda DNA በ1.25 ዩኒት Taq DNA Polymerase 200 μM dNTPs እና 0.2 μM ፕሪመርሮች በተገኙበት የሚጠበቀው 5 ኪ.ቢ. ምርትን ያስገኛል።
3.የ Exonuclease እንቅስቃሴ:ቢያንስ 12.5 U of Taq DNA Polymerase ከ10 nmol 5′-FAM oligonucleotide ጋር ለ30 ደቂቃ በ37 ℃ የያዘ የ50µl ምላሽ ምንም ሊታወቅ የሚችል ብልሽት አይሰጥም።
4.RNase እንቅስቃሴ:የ10µL ምላሽ 20 ዩ ኢንዛይም ከ1 ማይክሮግ አር ኤን ኤ ቅጂዎች ጋር ለ2 ሰአታት በ37°C መፈልፈሉ በጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንደተወሰነው የአር ኤን ኤ ውድቀት ሊታወቅ አልቻለም።
5.የሙቀት ማነቃቂያ;አይ.
ምላሽ ስርዓት
| አካላት | ድምጽ |
| አብነት ዲ ኤን ኤa | አማራጭ |
| 10 μM ወደፊት ፕሪመር | 0.5 ማይልስ |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 ማይልስ |
| dNTP ድብልቅ (እያንዳንዱ 10 ሚሜ) | 0.5 ማይልስ |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μኤል |
| ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴለ(5U/μL) | 0.125 ማይልስ |
| ከኑክሌር-ነጻ ውሃ | እስከ 25 μl |
ማስታወሻዎች፡-
1) ሀ.
| ዲ.ኤን.ኤ | መጠን |
| ጂኖሚክ | 1 ng-1 μግ |
| ፕላዝማ ወይም ቫይራል | 1 ገጽ-1 ንግ |
2) ለ.እጅግ በጣም ጥሩው የTaq DNA Polymerase ትኩረት በልዩ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ከ5-50 ዩኒት/ሚሊ (0.1-0.5 ዩኒት/25 µL ምላሽ) ሊደርስ ይችላል።
የሙቀት ብስክሌት ፕሮቶኮል
PCR
| ደረጃ | የሙቀት መጠን(° ሴ) | ጊዜ | ዑደቶች |
| የመነሻ መነጠልa | 95 ℃ | 1-3 ደቂቃ | - |
| ዲናትዩሽን | 95 ℃ | 15-30 ሳ | 30-35 ዑደቶች |
| ማቃለልለ | 45-68 ℃ | 15-60 ሴ | |
| ቅጥያ | 68 ℃ | 1 ኪባ/ደቂቃ | |
| የመጨረሻ ቅጥያ | 68 ℃ | 5 ደቂቃ | - |
ማስታወሻዎች፡-
1) ለአብዛኛዎቹ ማጉሊያዎች የ1 ደቂቃ የመነሻ ውዝዋዜ በ95°C በቂ ነው።ለአስቸጋሪ አብነቶች፣ ከ2-3mins በ95°ሴ ረዘም ያለ የ denaturation ይመከራል።በቅኝ ግዛት PCR፣ በ95°ሴ የመጀመሪያ 5mins denaturation ይመከራል።
2) የማስወገጃው ደረጃ ብዙውን ጊዜ ከ15-60 ሴ.የማደንዘዣ ሙቀት በፕሪመር ጥንድ Tm ላይ የተመሰረተ እና በተለምዶ ከ45-68℃ ነው።
